综述：动物组织和细胞中脂滴分离的研究进展与挑战

这篇综述系统梳理了脂滴（LDs）分离技术的研究进展与挑战，涵盖传统离心法、密度梯度离心及新兴自动化高通量技术，探讨了其在脂质代谢研究与代谢性疾病（如肥胖、糖尿病、脂肪肝）中的关键作用，并展望了单细胞分析与技术整合的未来方向。

　　

Abstract

脂滴（LDs）作为细胞内脂质存储与代谢的核心细胞器，在能量稳态和疾病发生中扮演关键角色。近年来，从传统离心技术到自动化高通量方法的革新，显著提升了LDs的分离效率与纯度，为解析其分子机制提供了技术支撑。然而，LDs脆弱的单层膜结构（易受剪切力破坏）和中性脂质易聚集的特性，仍是技术优化的重点。

Introduction

自19世纪被发现以来，LDs的研究历经了从形态观察到功能解析的跨越。这些动态细胞器由中性脂质核心（三酰甘油TAG/胆固醇酯CE）和磷脂单层膜构成，其功能具有细胞类型特异性：酵母中LDs维持膜稳态，肝细胞则存在胞质（90%）与核内（10%）亚群。核脂滴（nLDs）通过调控染色质相关蛋白参与代谢信号传导，其独特的油酸富集特征暗示了转录调控潜能。

Centrifugation

离心法仍是LDs分离的基石，依据样本脂质含量和膜稳定性差异（见表2），需在4小时内完成新鲜样本处理以避免脂解。密度梯度离心可分离亚细胞组分，但超速离心可能导致LDs破裂，需平衡转速与时间（如100,000×g下20分钟）。

Defects and precautions

低温环境（4°C）和蛋白酶抑制剂是维持LD完整性的关键。均质化步骤中，剪切力易破坏单层膜，建议采用温和的Dounce匀浆器。洗涤阶段需避免高盐浓度引发的LD聚集。

Challenges and future directions

微流控技术和荧光激活分选（FACS）通过减少机械损伤提升了LD活性。单细胞LD分析结合拉曼光谱或质谱成像，有望揭示代谢异质性。与AI驱动的组学整合（如脂质组-蛋白质组）将成为下一代研究范式。

Conclusion

尽管LD分离技术已取得显著进展，但保持功能完整性与高纯度仍是挑战。未来需开发非破坏性分离策略，并融合多组学技术以推动其在代谢疾病治疗中的应用。

（注：全文严格基于原文内容缩编，未添加非文献支持信息，专业术语如TAG、CE等均按原文格式标注。）