LINC00525通过稳定YAP蛋白促进膀胱癌侵袭转移的分子机制研究

本研究针对膀胱癌(BLCA)中长链非编码RNA LINC00525的促癌机制展开深入探索。研究人员通过TCGA数据库分析结合临床样本验证，首次揭示LINC00525通过双重调控机制（抑制YAP S127 位点磷酸化和K321 位点泛素化）稳定YAP蛋白，促进其核转位并激活下游转录程序，最终驱动膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。该研究为LINC00525高表达的恶性肿瘤提供了新的治疗靶点，发表于《Cancer Cell International》。

　　

膀胱癌作为泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其高复发率和晚期治疗困境始终是临床面临的重大挑战。尽管手术、化疗和免疫治疗等手段不断进步，但肿瘤转移和耐药性问题仍导致患者五年生存率难以提升。近年来，Hippo信号通路核心效应分子YAP（Yes-associated protein）的异常激活被证实与多种癌症进展密切相关，但其在膀胱癌中的调控机制尚未完全阐明。与此同时，长链非编码RNA（lncRNA）作为基因表达调控网络中的关键分子，在肿瘤发生发展中扮演着越来越重要的角色。

天津医科大学第二医院泌尿外科的研究团队在《Cancer Cell International》发表的研究成果，首次系统揭示了lncRNA LINC00525通过双重分子机制调控YAP蛋白稳定性，进而促进膀胱癌恶性进展的全新信号轴。研究人员通过TCGA数据库分析发现LINC00525在膀胱癌组织中显著高表达，且在肌肉浸润性膀胱癌（MIBC）中的表达水平明显高于非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）。这一发现随后在12对临床样本中得到验证，提示LINC00525可能与疾病进展密切相关。

研究采用的主要技术方法包括：TCGA和GEPIA数据库的生物信息学分析；12对临床样本的RNA提取和实时定量PCR（qRT-PCR）；膀胱癌细胞系（T24、5637等）的基因敲除（shRNA）和过表达实验；RNA pull-down和RNA免疫共沉淀（RIP）验证RNA-蛋白相互作用；免疫荧光和细胞组分分离检测YAP核质分布；泛素化实验和环己酰亚胺（CHX）追踪分析蛋白稳定性；以及裸鼠移植瘤模型验证体内表型。

LINC00525在膀胱癌中的表达特征
通过TCGA数据库分析405例膀胱癌和19例正常组织样本，结合12对临床样本验证，证实LINC00525在膀胱癌中显著高表达（图1A-D）。RNA原位杂交（RNA scope）进一步显示LINC00525在癌组织中的特异性富集（图1E）。值得注意的是，在更具侵袭性的MIBC亚型中，LINC00525表达水平显著高于NMIBC（图1F），且与增殖标志物KI67表达呈正相关。

LINC00525的促癌功能验证
在T24和BIU87细胞系中，敲除LINC00525显著抑制细胞增殖（MTT和克隆形成实验）、迁移（划痕实验）和侵袭（Transwell实验）能力（图3A-E）；而过表达则产生相反效应（图3F-J）。这些结果在多种膀胱癌细胞系中得到重复验证，表明LINC00525具有广谱的促癌作用。

LINC00525/YAP信号轴的发现
生物信息学分析发现74个YAP与LINC00525共同调控的靶基因（图2A）。实验证实LINC00525可上调YAP蛋白而非mRNA水平（图2B-D）。亚细胞定位预测显示LINC00525主要分布于胞质（图2E），RNA pull-down和RIP实验证实其直接结合YAP蛋白（图2F）。机制研究表明，LINC00525通过两个关键位点调控YAP：1）减少S¹²⁷
磷酸化，促进核转位（图2G-I）；2）抑制K³²¹
泛素化，延长蛋白半衰期（图5A-C）。

YAP介导的生物学效应
功能回复实验证明，YAP过表达可逆转LINC00525敲除的抑癌效应（图4A-D），而YAP抑制剂（Cytochalasin D）则能抵消LINC00525过表达的促癌作用（图4E-H）。免疫共沉淀显示LINC00525增强YAP-TEAD1结合，同时减弱YAP-LATS1相互作用（图2K）。下游转录靶点CTGF、CYR61和ANKRD1的表达变化进一步验证了该通路的激活（图2I-J）。

动物模型验证
裸鼠移植瘤实验显示，LINC00525敲除显著抑制肿瘤生长，而YAP激活剂（GA-017）可部分恢复肿瘤增殖（图6A-D）；反之，LINC00525过表达促进肿瘤生长，该效应可被YAP抑制剂阻断（图6E-H）。免疫组化证实肿瘤组织中YAP及其靶蛋白表达变化与体外实验一致。

这项研究首次阐明LINC00525通过"去磷酸化-核转位"和"去泛素化-蛋白稳定"双重机制激活YAP信号通路，为理解膀胱癌进展提供了新的分子视角。特别值得注意的是，研究团队精准定位了LINC00525与YAP蛋白CC结构域（氨基酸305-355）的相互作用界面，并证实K³²¹
是调控YAP稳定性的关键位点（图5D-H）。这些发现不仅拓展了对lncRNA调控蛋白质翻译后修饰的认识，更为LINC00525高表达的恶性肿瘤（尤其是晚期膀胱癌）提供了潜在的治疗靶点。未来研究可进一步探索靶向该通路的特异性抑制剂，或开发基于LINC00525的预后评估体系。