环状RNA circDhx32通过竞争性结合FOXO1抑制AdipoR1转录加剧心肌缺血再灌注损伤的炎症反应

本研究针对心肌缺血再灌注损伤（I/R）中炎症反应调控机制不明的临床难题，哈尔滨医科大学团队发现环状RNA circDhx32通过m6 A甲基化修饰依赖的稳定性调控，竞争性结合转录因子FOXO1抑制AdipoR1-AMPK-NF-κB通路激活，从而加剧心脏炎症损伤。该研究揭示了ALKBH5/YTHDF2/YTHDC1介导的circDhx32表观遗传调控新机制，为缺血性心脏病治疗提供了潜在靶点。

　　

研究背景与意义
心肌缺血再灌注损伤（I/R）是心血管疾病死亡的主要原因，尽管血运重建能挽救缺血心肌，但再灌注过程本身会引发炎症风暴导致二次损伤。目前临床缺乏特异性干预手段，其核心机制与环状RNA（circRNA）和m⁶
A RNA甲基化等表观遗传调控密切相关。哈尔滨医科大学团队发现circDhx32在I/R模型中异常高表达，但其通过何种分子机制调控炎症反应尚未阐明，这为探索心脏保护新靶点提出了关键科学问题。

研究方法概要
研究通过构建小鼠左冠状动脉前降支结扎模型（45分钟缺血/24小时或2周再灌注）和心肌细胞缺氧复氧（H/R）模型，结合m⁶
A-circRNA表观转录组芯片筛选关键分子。采用AAV9介导的心肌特异性circDhx32敲降、RNA免疫共沉淀（RIP）、染色质免疫共沉淀（ChIP）和双荧光素酶报告基因等技术，解析ALKBH5/YTHDF2/YTHDC1对circDhx32稳定性的调控，并验证其通过FOXO1-AdipoR1-AMPK-NF-κB通路影响炎症反应的机制。

研究结果
1. circDhx32在I/R损伤中显著上调
m⁶
A-circRNA芯片显示I/R组circDhx32的m⁶
A修饰水平降低但表达量升高。RNase R和放线菌素D实验证实其环状结构稳定性优于线性RNA。FISH定位发现H/R促进circDhx32核内聚集。

2. circDhx32敲降改善心脏功能
心肌特异性敲降circDhx32的小鼠EF值提高28.6%，梗死面积减少42%，血清cTnT和CK-MB水平下降。Masson染色显示纤维化减轻，H&E染色证实炎症浸润缓解。

3. m⁶
A修饰调控circDhx32稳定性
ALKBH5介导的m⁶
A去甲基化使YTHDF2结合减少，导致circDhx32半衰期延长；同时YTHDC1识别障碍抑制其核输出，共同促进核内累积。

4. circDhx32-FOXO1互作抑制AdipoR1转录
RIP和FISH-IF显示circDhx32与FOXO1核内共定位增强。ChIP和EMSA证实circDhx32竞争性占据FOXO1对AdipoR1启动子（-613至-623 bp）的结合位点，使AdipoR1蛋白表达降低56%。

5. AdipoR1-AMPK-NF-κB通路调控炎症
circDhx32敲降使p-AMPK/AMPK比值升高1.8倍，p-p65/p65降低62%，IL-6、TNF-α等炎症因子mRNA水平下降约70%。

结论与展望
该研究首次揭示ALKBH5通过去除circDhx32的m⁶
A修饰，经YTHDF2/YTHDC1依赖性途径促进其核滞留，进而劫持FOXO1抑制AdipoR1转录，最终通过AMPK-NF-κB通路加剧炎症损伤。这不仅阐明了circRNA在心脏损伤中的表观调控新机制，更为重要的是，circDhx32可作为早期干预缺血性心脏病的潜在靶点，为开发靶向m⁶
A-circRNA的疗法提供了理论依据。未来研究可进一步探索circDhx32是否通过miRNA海绵作用参与调控网络，以及其在其他器官缺血损伤中的普适性。