m6A阅读蛋白IGF2BP2稳定长链非编码RNA LHX1-DT通过吸附miR-590-5p抑制肾细胞癌进展的机制研究

本研究针对肾细胞癌(RCC)中m6A修饰与长链非编码RNA(LHX1-DT)的调控机制不明的问题，通过微阵列分析和功能实验揭示了METTL14介导的m6A修饰通过IGF2BP2稳定LHX1-DT，进而作为竞争性内源RNA(ceRNA)吸附miR-590-5p上调PDCD4表达，最终抑制RCC增殖和侵袭的分子通路。该发现为RCC预后评估和靶向治疗提供了新标志物和干预靶点。

　　

肾细胞癌(RCC)是全球泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其早期症状隐匿且晚期治疗效果差，五年生存率不足15%。尽管靶向治疗和免疫治疗取得进展，但耐药性和个体差异仍是临床挑战。近年来，RNA表观遗传修饰N⁶
-甲基腺苷(m6A)被发现在多种癌症中调控基因表达，但其在RCC中的作用机制，特别是与长链非编码RNA(lncRNA)的交互关系尚未阐明。

中国医科大学附属盛京医院泌尿外科Kefeng Wang团队在《npj Precision Oncology》发表的研究，通过整合m6A-mRNA/lncRNA表观转录组微阵列、RNA免疫沉淀(RIP)和体内外功能实验，首次揭示了m6A阅读蛋白IGF2BP2通过识别METTL14介导的m6A修饰位点稳定LHX1-DT，进而调控miR-590-5p/PDCD4轴抑制RCC进展的分子机制。研究团队采用52对RCC临床样本进行qRT-PCR验证，结合细胞增殖/侵袭实验和裸鼠原位移植瘤模型，并运用meRIP-qPCR、双荧光素酶报告基因等关键技术验证分子互作。

m6A水平在RCC组织和细胞系中下调
通过比色法检测发现RCC组织和细胞系(Caki-1、786-O、ACHN)的m6A水平显著低于正常组织(P<0.05)，Western blot显示甲基转移酶METTL14在RCC中表达降低，过表达METTL14可显著提升Caki-1细胞的m6A水平。

LHX1-DT是m6A调控的关键靶基因
微阵列分析鉴定出3950个差异m6A-lncRNA，其中LHX1-DT的m6A修饰水平下降最显著。临床样本验证显示LHX1-DT低表达与Fuhrman分级晚期(P=0.0386)和不良预后相关。meRIP-qPCR证实RCC中LHX1-DT的m6A修饰减少约60%。

LHX1-DT抑制RCC细胞增殖和侵袭
过表达LHX1-DT使786-O和Caki-1细胞增殖率下降45%-52%，侵袭细胞数减少3.1倍；裸鼠模型中肿瘤体积缩小67%(P<0.01)。免疫组化显示Ki67阳性率降低，证实其抑癌作用。

ceRNA机制解析
RNA-FISH和核质分离实验确认LHX1-DT主要定位于胞质。AGO2-RIP实验捕获到LHX1-DT-miR-590-5p复合物，双荧光素酶报告系统验证二者通过"UUGGACU"位点结合。生物素标记的LHX1-DT可下拉miR-590-5p，挽救实验证明LHX1-DT通过拮抗miR-590-5p抑制肿瘤进展。

m6A依赖性稳定机制
RIP实验显示IGF2BP2特异性结合LHX1-DT(P<0.001)，突变m6A位点"UUGGACU"后结合活性丧失。放线菌素D处理证实IGF2BP2延长LHX1-DT半衰期2.3倍，METTL14敲除则缩短其稳定性达58%。

下游信号通路
PDCD4被鉴定为miR-590-5p直接靶标，其表达与LHX1-DT正相关(r=0.8933)。过表达PDCD4可逆转miR-590-5p促侵袭效应，而敲除PDCD4则削弱LHX1-DT的抑癌作用，证实PDCD4是功能效应分子。

该研究首次阐明m6A-IGF2BP2-LHX1-DT-miR-590-5p-PDCD4轴在RCC中的调控网络，不仅为理解m6A修饰lncRNA的生物学功能提供新视角，更通过鉴定LHX1-DT作为独立预后标志物(P=0.0317)和潜在治疗靶点，为RCC精准诊疗策略开发奠定理论基础。研究采用的临床样本队列与多组学整合分析策略，为肿瘤表观遗传研究提供了方法论参考。未来针对该通路的药物开发或可改善晚期RCC患者的治疗困境。