近红外标记抗体靶向肿瘤相关异种抗原N-糖基化神经氨酸GM3神经节苷脂的临床前评估

这篇研究推荐重点关注抗Neu5Gc-GM3神经节苷脂的人源化抗体14F7hT与近红外染料IRDye800CW的偶联探针（14F7hT-IRDye800CW）在荧光引导手术中的潜力。研究证实该探针在小鼠模型中具有高纯度（98%）、低非特异性摄取和12-48小时的最佳肿瘤积累窗口，且无观察不良反应剂量（NOAEL）达50 mg/kg。其靶向的Neu5Gc-GM3作为肿瘤特异性异种抗原（TAX），在多种癌症中高表达，为临床转化提供了新工具。

　　

Abstract
研究评估了靶向异种抗原N-糖基化神经氨酸GM3神经节苷脂（Neu5Gc-GM3）的荧光探针14F7hT-IRDye800CW的临床前性能。该探针在良好实验室规范（GLP）条件下制备，染料与蛋白标记比为1.2±0.2，纯度为98±2%。通过流式细胞术验证，其与表达靶点的P3X63Ag8.653细胞结合的表观解离常数（K_D,app
）为240±20 nM，且偶联后结合活性不变。

Introduction
分子靶向探针在荧光引导手术中用于肿瘤边缘评估和前哨淋巴结检测。Neu5Gc-GM3是一种唾液酸化异种抗原（TAX），人类因CMAH基因失活无法合成，但通过饮食摄入并在肿瘤中富集。14F7抗体对Neu5Gc-GM3具有高度特异性，其晶体结构（PDB:1R1H）和单链抗体片段（scFv）已解析。临床研究表明，Neu5Gc-GM3在乳腺癌、非小细胞肺癌（NSCLC）等多种癌症中高表达，且与不良预后相关。

Materials and Methods
探针通过NHS-IRDye800CW与抗体伯胺基团偶联形成酰胺键（图2c）。体内实验采用CD-1裸鼠模型，静脉注射0.5 nmol探针，通过小动物成像系统（LI-COR Pearl Impulse）监测荧光信号。药代动力学分析显示半衰期为1.13±0.03天，稳态分布容积为116±8 mL/kg。

Results

1. 肿瘤靶向性：14F7hT-IRDye800CW在Neu5Gc-GM3阳性异种移植瘤中信号显著高于对照（24小时TBR=8±2），峰值出现在12-48小时（图3）。
2. 生物分布：探针主要通过肝脏清除，肿瘤信号比肝脏高5倍（图4）。阴性对照A-431肿瘤的摄取仅为背景水平。
3. 安全性：急性毒性试验中，50 mg/kg剂量（相当于人体4.1 mg/kg）未观察到不良反应（NOAEL）。血液学和生化参数均在正常范围内（补充图7-9）。

Discussion
14F7hT-IRDye800CW的快速肿瘤积累（24小时峰值）和低正常组织摄取归因于其对Neu5Gc-GM3的“亲和力优化”结合特性。与抗EGFR抗体（如西妥昔单抗-IRDye800CW）相比，其更早的峰值时间（24小时 vs 48-96小时）更适合术中应用。尽管小鼠表达内源性Neu5Gc-GM3，探针仍表现出高特异性，提示其在人类（缺乏CMAH）中的潜在优势。

Conclusions
14F7hT-IRDye800CW是一种安全、高效的荧光引导手术候选探针，其临床转化将受益于Neu5Gc-GM3在多种癌症中的广泛表达和已有的人体试验数据（如14F7-^99m
Tc SPECT成像）。推荐首次人体试验剂量为300 mg/受试者（按质量换算）。