有机溶剂对OATP1B1/1A2/2B1体外转运活性的定量影响及其在药物相互作用研究中的意义

本研究针对有机溶剂（DMSO/甲醇/乙醇）在体外转运实验中可能抑制OATP（有机阴离子转运多肽）活性的问题，通过HEK293细胞模型定量评估了三种溶剂对OATP1B1/1A2/2B1介导的DCF/E3S摄取的抑制作用，首次系统测定IC20 值（0.51-3.8%），为优化转运体活性实验条件提供了关键数据支撑。

　　

在药物研发过程中，准确评估转运体功能对预测药物相互作用至关重要。有机阴离子转运多肽（Organic Anion Transporting Polypeptides, OATPs）作为溶质载体家族的重要成员，介导了多种临床药物（如他汀类降脂药）的肠道吸收和肝脏摄取。然而，体外研究长期面临一个技术难题：溶解药物底物必须使用的有机溶剂（如DMSO、甲醇、乙醇）可能干扰转运体活性，但具体影响程度一直缺乏系统量化。这导致实验设计中溶剂浓度选择缺乏依据，可能造成假阴性或假阳性结果。

针对这一空白，研究人员开展了一项开创性研究。通过构建稳定表达OATP1B1、1A2和2B1的HEK293细胞模型，采用放射性标记底物[³
H]E3S和荧光探针DCF，结合液闪计数和荧光检测技术，首次系统评估了三种常用有机溶剂对转运活性的浓度依赖性抑制。实验设计巧妙地区分了不同OATP亚型的底物偏好：OATP1B1采用DCF（pH 7.4），而OATP1A2/2B1使用E3S（pH 6.3模拟肠道微环境），并通过非线形回归计算IC₂₀
值（抑制20%活性的溶剂浓度）。

2. Materials and methods
关键技术包括：1）稳定转染OATP亚型的HEK293细胞模型；2）基于96孔板的微量转运实验（5分钟短时暴露）；3）双标记检测（液闪计数测E3S、荧光法测DCF）；4）BCA法蛋白定量校正；5）MLAB程序非线性拟合计算IC₅₀
/IC₂₀
。

3. Results
研究发现：甲醇和乙醇对所有OATP亚型均呈浓度依赖性抑制，IC₂₀
分别为2.4-3.4%和0.51-3.8%。DMSO表现出显著亚型选择性：对OATP2B1无显著抑制（10%浓度仍保持88%活性），但对OATP1B1和1A2的IC₂₀
分别达3%和0.7%。特别值得注意的是，OATP1A2对乙醇异常敏感（IC₂₀
仅0.8%），而OATP2B1对DMSO表现出独特耐受性。

4. Discussion
这项研究首次建立了有机溶剂影响OATP活性的定量标准：
1）溶剂选择性：DMSO对OATP2B1的"豁免效应"提示其可能通过变构机制干扰特定亚型的构象变化；
2）实验设计指导：建议将DMSO控制在<1%（OATP1B1/1A2）或<10%（OATP2B1），乙醇需<0.5%；
3）临床转化意义：使用不同溶剂的体外数据需校正溶剂效应后才能外推至体内；
4）未解之谜：OATP存在多底物结合位点（如1B1的DCF位点与胆红素位点不同），溶剂对不同底物的差异影响有待进一步研究。

该成果发表于《Toxicology in Vitro》，为优化转运体研究方案提供了关键参数，同时揭示了有机溶剂-转运体相互作用的复杂生物学机制。未来研究可扩展至更多底物类型和转运体家族，以全面绘制溶剂干扰图谱。第一作者Rina Saito等强调，在评估药物-转运体相互作用时，必须将溶剂浓度控制在IC₂₀
以下，否则可能高估抑制剂效力。这一标准对提高体外-体内预测相关性具有重要实践价值。