成都献血者D变异体的血清学特征与分子遗传学分析及其在中国人群中的输血安全策略优化

为解决D变异体个体在接触RhD阳性红细胞时可能产生抗-D免疫的风险问题，研究人员对成都献血者开展了D变异体的血清学谱分析和分子特征研究。通过PCR-SSP和Sanger测序技术，鉴定出RHD15、RHDDEL1和RHD*06.03.01等高频变异体，并发现2个新等位基因。研究为中国人群定制经济高效的RHD基因分型策略提供了数据支持，对输血安全管理和稀有血型资源利用具有重要意义。

　　

RhD血型系统是临床输血和妊娠管理中最重要的血型系统之一，其D抗原的高免疫性可引发严重的溶血性输血反应（HTR）或新生儿溶血病（HDFN）。然而，D抗原存在数百种变异体，包括弱D（Weak D）、部分D（Partial D）和DEL型，这些变异体在抗原表达量和表位完整性上存在差异，导致临床分型困难。尤其在中国人群中，D变异体的遗传特征与高加索人群显著不同，但现有基于西方人群设计的基因分型试剂盒检测效能有限。如何精准识别高风险D变异体，既避免不必要的Rh阴性血液浪费，又确保输血安全，成为亟待解决的临床难题。

针对这一挑战，成都血液中心的研究团队对2019-2022年间近百万献血者样本展开系统研究。通过微孔板法初筛后，对IgM抗-D阴性样本采用单克隆抗-D试剂 panel 进行微柱凝胶卡和盐水法复检，对无法明确分类的样本进行PCR-SSP分析和Sanger测序，同时通过杂交恒河猴盒（hybrid Rhesus boxes）检测确定RHD基因合子状态。该研究最终发表于《Transfusion Clinique et Biologique》，为建立适合中国人群的RHD基因分型策略提供了关键数据。

主要技术方法
研究采用三级检测策略：1）微孔板法初筛（IgM抗-D试剂）；2）微柱凝胶卡和盐水法复检（单克隆抗-D panel）；3）分子检测（PCR-SSP分型、Sanger测序和杂交恒河猴盒分析）。样本来源于成都献血者队列（n≈1,000,000），最终对100例血清学不确定样本完成基因分型。

研究结果

Abstract
研究发现RHD15、RHDDEL1和RHD06.03.01占所有D变异体的61%，这些变异体与特定抗-D试剂的反应模式具有特征性。此外检出8个已报道的稀有等位基因（如RHD01W.95、RHD*01W.72等）和2个新变异体（c.283G>T和c.84C>G）。所有D变异体样本均未检测到抗-D抗体形成。

Introduction
系统阐述了D变异体的临床分类：弱D（定量抗原减少）、部分D（表位缺失）和DEL（极弱表达）。强调中国人群常见RHDDEL1（低风险）与RHD15/RHD*06.03.01（高风险）的免疫原性差异，指出现有分型技术对东亚人群的局限性。

Methods
建立分层检测流程：血清学初筛→单克隆抗体复检→分子确认。特别采用多种抗-D试剂（如克隆号Rum-1）进行表位图谱分析，PCR-SSP覆盖中国人群高频变异位点，Sanger测序用于新变异发现。

Results
高频变异体呈现特异性反应模式：RHD15对某些抗-D完全不反应，RHDDEL1需增强技术检测。新发现的c.283G>T（p.Ala95Ser）位于第2外显子，可能影响蛋白质折叠；c.84C>G（p.Cys28Trp）涉及保守半胱氨酸残基改变。

Discussion
成都献血者D变异体谱显示明显地域特征：RHD15（25.3%）、RHDDEL1（19.8%）和RHD06.03.01（15.9%）合计占比超60%，与高加索人群以RHD01W.1-3为主的分布截然不同。研究提出的"血清学初筛+靶向基因检测"策略，可将测序成本降低70%，特别适合中国血站大规模筛查。

结论与意义
该研究首次系统描绘了中国西南地区献血者D变异体的分子流行病学图谱，证实基于人群特征的靶向分型策略的高效性。发现的两个新等位基因拓展了对RHD基因多样性的认知。研究成果可直接指导临床实践：RHD15/RHD06.03.01携带者应作为RhD阴性管理，而RHD*DEL1个体可安全接受RhD阳性血液，这对优化稀有血型资源分配和预防抗-D免疫具有重要价值。未来需开展前瞻性研究验证这些变异体的实际免疫风险，并开发配套的快速分子诊断技术。