DAP10共刺激信号增强NKp30嵌合抗原受体T细胞抗肝癌效应的机制研究

针对CAR-T细胞在实体瘤中疗效受限的难题，福建肿瘤医院团队创新性构建了靶向B7H6的NKp30-DAP10 CAR-T细胞。研究发现，相较于传统NKp30-CD28 CAR-T，该设计通过DAP10信号通路显著提升T细胞增殖能力（p<0.01），诱导中央记忆表型（TCM ），并促进IL-2/IFN-γ分泌（提升2.3倍）。在肝癌荷瘤模型中实现肿瘤体积缩小68%（p<0.0001），为克服实体瘤免疫抑制微环境提供了新策略。

　　

在肿瘤免疫治疗领域，嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法虽在血液肿瘤中取得突破，但面对实体瘤时仍遭遇多重壁垒：肿瘤微环境抑制、靶抗原异质性、T细胞耗竭等问题如同"免疫荒漠"般阻碍疗效。其中，肝癌作为全球高发恶性肿瘤，其免疫治疗进展尤为缓慢。传统CAR-T设计中，CD28或4-1BB等共刺激结构域虽能激活T细胞，却可能导致过度耗竭或效应记忆表型（T_EM
）分化，影响长期抗肿瘤效果。

福建肿瘤医院的研究团队独辟蹊径，从自然杀伤（NK）细胞的"侦察兵"——NKp30受体获得灵感。该受体配体B7H6如同肿瘤的"危险信号旗"，在肝癌等实体瘤中特异性高表达（HepG2细胞表达量达65.3±2.1%，p<0.0001），而在正常组织几乎"隐身"。研究人员创新性地将DNAX激活蛋白10（DAP10）的胞内结构域植入CAR骨架，构建出第三代NKp30-DAP10 CAR-T细胞，与常规NKp30-CD28 CAR-T展开"头对头"较量。

研究采用多组学技术联用策略：通过TCGA数据库分析B7H6（NCR3LG1）的泛癌表达谱；利用流式细胞术检测HCC细胞系表面B7H6表达差异；采用阻抗实时细胞分析（xCELLigence RTCA）系统量化杀伤动力学；建立3D肝癌球模型模拟实体瘤微环境；并在BALB/c裸鼠移植瘤模型中验证疗效（n=5/组）。

Heterogeneous expression of B7H6 in tumor tissue and cell lines of HCC
通过生物信息学挖掘发现，B7H6在肝癌组织呈现"马赛克式"异质性表达，临床样本免疫组化显示阳性率波动在35-78%。体外实验证实，SK-Hep1细胞几乎不表达B7H6（1.3±5.3%），而HepG2、97H等细胞系表达量超65%（p<0.0001），为后续功能实验提供理想模型。

Generation and identification of NKp30 car-t cells with different co-stimulatory domains
新型CAR结构将NKp30胞外域与CD28跨膜域、DAP10-4-1BB-CD3ζ信号域串联（图2A）。流式检测显示，DAP10组转导效率达81.0±1.8%，显著高于野生型（30.5±6.3%，p<0.05）。培养28天时，DAP10组细胞扩增倍数较对照组提升3.2倍（p<0.01），展现卓越的存活优势。

chNKP30-Dap10 enhances the proliferation and activation of T cells following antigen stimulation
当遭遇B7H6⁺
肿瘤细胞时，DAP10组T细胞增殖指数较CD28组提高1.8倍。激活标志物CD69/CD25表达量呈"双峰"升高，尤其值得注意的是，对B7H6^-
的SK-Hep1细胞，DAP10组仍保持基础激活水平，暗示其可能存在非经典识别机制。

chNKP30-Dap10 reduces apoptosis, inhibits cell exhaustion, and induces a central memory phenotype
在7天无IL-2培养条件下，DAP10组凋亡率较野生型降低57%（p<0.001）。经历三轮抗原刺激后，耗竭标志物PD-1/TIM-3表达量仅为CD28组的1/3。记忆表型分析揭示，DAP10组中央记忆T细胞（T_CM
，CD45RO⁺
CD62L⁺
）占比达42%，而CD28组以效应记忆表型（T_EM
）为主（68%），这为长期免疫监视奠定基础。

chNKP30-Dap10 stimulates the secretion of proinflammatory cytokines and decreases the levels of anti-inflammatory cytokines
细胞因子阵列显示，DAP10组产生"炎症风暴"级反应：IL-2分泌量达1580 pg/mL，是CD28组的2.1倍（p<0.001）；IFN-γ/TNF-α联合输出形成"双剑合璧"效应。而CD28组却反常高分泌免疫抑制因子IL-10（320 pg/mL），这可能是临床观察中CD28 CAR-T易引发细胞因子释放综合征（CRS）的潜在原因。

chNKP30-Dap10 enhanced the anti-tumor activity of CAR-T cells in vitro
实时阻抗检测显示，DAP10组在24小时内即可清除85% HepG2细胞（E:T=3:1）。3D肿瘤球共培养实验中，红色CMFDA标记的肝癌球被绿色CAR-T细胞"包抄瓦解"，活细胞成像捕捉到DAP10组对B7H6^-
细胞的"旁观者杀伤"现象，提示DAP10可能通过NKG2D串话激活天然免疫识别。

chNKP30-Dap10 CAR-T cells exhibit excellent activity against hepatocellular carcinoma xenografts
动物实验证实，DAP10组治疗后27天肿瘤体积仅增长至112 mm3，显著小于CD28组（486 mm3，p<0.01）。解剖显示肿瘤重量减轻72%（p<0.0001），病理切片可见显著淋巴细胞浸润，且未发现肝毒性等不良反应。

在讨论环节，作者指出DAP10的Y_xx
M基序通过PI3K-AKT-mTOR通路"三重奏"，既维持T细胞代谢活力，又避免过度激活导致的耗竭。该研究突破传统CAR设计范式，首次将NK细胞受体与T细胞共刺激域"跨界融合"，其创新性体现于三方面：1）利用B7H6的肿瘤特异性实现精准打击；2）通过DAP10诱导持久性T_CM
分化；3）双重识别机制克服抗原逃逸。

这项发表于《Translational Oncology》的研究，为肝癌等实体瘤免疫治疗提供了"一箭双雕"的新策略：既通过NKp30靶向肿瘤相关抗原，又借助DAP10信号重塑T细胞命运。未来若能结合PD-1抑制剂等免疫检查点阻断，或可进一步突破肿瘤免疫抑制屏障，推动CAR-T疗法在实体瘤领域的临床转化。