靶向猪瘟病毒Erns 蛋白的单克隆抗体开发及其在病毒检测中的应用

为解决猪瘟病毒(CSFV)早期诊断难题，印度农业研究委员会团队成功表达并纯化Erns 蛋白，制备15株特异性单克隆抗体(mAbs)。该研究通过间接ELISA和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)验证mAbs对天然抗原的反应性，为开发高灵敏度诊断工具奠定基础，对CSF疫情防控具有重要意义。

　　

猪瘟（Classical Swine Fever, CSF）被称为养猪业的"头号杀手"，这种由猪瘟病毒(CSFV)引起的烈性传染病可导致生猪高热、出血甚至死亡，每年造成全球数十亿美元经济损失。尽管疫苗已广泛应用，但病毒持续变异和隐性感染使得精准诊断成为防控关键。目前市售检测试剂多靶向E2蛋白，而对另一重要结构蛋白E^rns
（具有RNase活性的囊膜糖蛋白）的研究相对滞后。印度农业研究委员会兽医流行病学与疾病信息研究所团队在《Veterinary Immunology and Immunopathology》发表的研究，为这一领域带来了突破性进展。

研究团队采用原核表达系统在E. coli中高效表达全长E^rns
蛋白，通过镍柱亲和层析获得高纯度抗原。利用杂交瘤技术制备的15株单克隆抗体(mAbs)经多轮筛选，证实可特异性识别天然病毒抗原。研究选用PK-15细胞培养病毒，采用免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)作为评价标准，同时纳入20份临床血清样本（10阳性/10阴性）验证诊断潜力。

表达与纯化E^rns
蛋白
SDS-PAGE显示诱导后的E. coli成功表达33 kDa目标蛋白，纯化后浓度达21±3.5 mg/mL。Western blot和iELISA证实该重组蛋白保留天然构象表位，能与CSFV阳性血清发生特异性反应。

单克隆抗体制备与鉴定
通过脾脏免疫-细胞融合流程获得15株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。其中3株（克隆号未公开）在IPMA中显示强阳性反应，能检测细胞培养物中低至10^2.5
TCID₅₀
/mL的病毒滴度，灵敏度媲美商品化E2靶向试剂。

讨论与展望
该研究首次系统评估E^rns
靶向mAbs在CSFV检测中的应用价值。相较于传统E2抗体，E^rns
抗体具有独特优势：该蛋白在病毒进化中高度保守，可减少毒株变异导致的漏检风险；其分泌型特性便于早期抗原检测。团队负责人Madhusudan Hosamani指出，这些mAbs为开发新一代抗原检测试纸条和ELISA试剂盒提供核心原料，尤其适合农场现场快速筛查。未来研究将扩大临床样本验证规模，并探索mAbs在区分野毒感染与疫苗免疫(DIVA)策略中的潜力。

这项研究不仅填补了E^rns
蛋白诊断试剂的空白，更为重要的是，其建立的技术路线可为其他动物病毒mAbs开发提供范式。随着进一步优化，这些试剂有望成为WOAH（世界动物卫生组织）推荐诊断方法的有力补充，助力全球CSF净化计划实施。