基于Zera纳米颗粒递送系统的猪瘟-猪圆环病毒2型二联亚单位疫苗的免疫原性评估

为解决猪瘟病毒(CSFV)与猪圆环病毒2型(PCV2)共感染造成的重大经济损失，研究人员利用Zera纳米颗粒递送系统，构建了同时表达CSFV E0/E2蛋白和PCV2 Cap蛋白的新型二联疫苗。通过BALB/c小鼠模型证实，该疫苗能高效诱导体液与细胞免疫应答，为开发安全高效的多病原亚单位疫苗提供了新策略。

　　

猪瘟和猪圆环病毒病是严重危害全球养猪业的两种重要传染病。猪瘟病毒(CSFV)属于黄病毒科，其E0和E2糖蛋白是关键的免疫保护性抗原；而猪圆环病毒2型(PCV2)的Cap蛋白则是构成病毒衣壳的主要结构蛋白，也是疫苗研发的核心靶点。当前CSFV疫苗主要采用兔化弱毒苗，PCV2疫苗多为全病毒灭活苗，但传统疫苗存在生物安全风险且无法有效应对共感染。开发能同时预防两种疾病的新型疫苗成为产业迫切需求。

宁夏大学的研究团队创新性地利用玉米γ-zein蛋白的N端结构域Zera，构建了基于纳米颗粒递送系统的二联亚单位疫苗。Zera能自发形成0.4-1.3μm的蛋白体(Protein bodys, PBs)，具有优异的抗原递送能力。研究人员通过昆虫杆状病毒表达系统，将CSFV的E0-E2融合蛋白、PCV2 Cap蛋白与Zera及分子佐剂MTB32C进行共表达，制备了32C-Zera-E0-E2-Cap纳米颗粒疫苗。

关键技术包括：1) 采用双启动子杆状病毒载体共表达多抗原；2) 引入结核分枝杆菌MTB32C片段作为分子佐剂；3) 通过免疫荧光定位验证纳米颗粒表达；4) 使用BALB/c小鼠模型评估免疫效果。

【Vector construction and gene design】
通过分子克隆技术，将CSFV Shimon株E0/E2基因、PCV2 Cap基因与Zera序列融合，构建重组质粒pFastBac dual-Zera-32C-E0-E2-mCherry-Cap-eGFP，经双酶切和PCR验证正确。

【Construction and characterization】
免疫荧光显示转染Sf9细胞120小时纳米颗粒表达量最高，成功观察到E0/E2和Cap蛋白在细胞质中的共定位，证实了多抗原的协同表达。

【Immunolocalization of nanoparticles】
共聚焦显微镜显示纳米颗粒直径约800nm，表面呈现典型的花瓣状结构，Western blot证实所有目标蛋白均正确表达。

【Discussion】
与传统疫苗相比，该纳米疫苗能同时激活Th1和Th2型免疫应答，血清抗体滴度较单抗原疫苗提高3-5倍，且诱导了更强的IFN-γ分泌。Zera的"自组装"特性使抗原呈递效率提升，而MTB32C佐剂增强了交叉呈递作用。

【Conclusion】
研究成功开发出全球首个基于Zera的CSFV-PCV2二联纳米疫苗，其创新性体现在：1) 实现单一纳米颗粒负载多病原关键抗原；2) 首次将植物源性Zera应用于猪用疫苗；3) 免疫效果优于传统灭活苗。该研究为多病原联合疫苗研发提供了新范式，论文发表于《Veterinary Immunology and Immunopathology》。