牛冠状病毒核衣壳蛋白首个线性B细胞表位380 YQQQDG385 的鉴定及其跨种保守性分析

本研究针对牛冠状病毒（BCoV）核衣壳蛋白（N）的免疫诊断和疫苗开发需求，通过原核表达系统制备可溶性重组N蛋白，免疫BALB/c小鼠获得两株特异性单抗（2F9、7H6），首次鉴定出高度保守的线性B细胞表位380 YQQQDG385 。该表位在β冠状病毒属中仅与人冠状病毒OC43及犬冠状病毒CRCoV/BJ-221完全同源，为病毒跨种传播机制研究及精准诊断技术开发提供关键靶点。

　　

牛冠状病毒（BCoV）是引发犊牛腹泻和成年牛冬季痢疾的重要病原体，其核衣壳蛋白（N蛋白）作为病毒含量最高的结构蛋白，具有高度保守性，能激发宿主强烈的体液与细胞免疫应答，是早期诊断和疫苗设计的理想靶标。然而，长期以来BCoV N蛋白的抗原表位研究存在空白，制约了高灵敏度诊断方法的开发。更引人深思的是，流行病学证据显示BCoV可能通过跨种传播演化为人冠状病毒OC43，但这一过程的分子机制尚未阐明。

为解决上述问题，来自黑龙江某高校的研究团队在《Virology》发表论文，首次鉴定了BCoV N蛋白的线性B细胞表位，并揭示其跨种保守性特征。研究采用pET-32a/BL21原核表达系统制备可溶性N蛋白，免疫BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术获得两株特异性单抗（2F9、7H6），结合重叠肽扫描技术定位表位序列，并通过同源比对分析其物种特异性。

主要技术方法

1. 原核表达系统：利用pET-32a载体在BL21菌株中表达可溶性BCoV N蛋白；
2. 单抗制备：通过杂交瘤技术从免疫小鼠脾细胞中筛选N蛋白特异性单抗；
3. 表位定位：采用重叠肽扫描确定最小表位序列；
4. 生物信息学分析：比对9株BCoV及β冠状病毒属其他成员的同源序列。

研究结果

Production of BCoV N-protein-specific mAbs
重组N蛋白经非变性纯化后呈现66 kDa单一条带（图1A），免疫小鼠血清抗体效价达1:8000。获得的2F9和7H6单抗能特异性识别天然N蛋白，为后续表位鉴定奠定基础。

Identification of a novel linear B-cell epitope
通过12-mer重叠肽库筛选，确定两株单抗共同识别的核心表位为³⁸⁰
YQQQDG³⁸⁵
。该序列在9株BCoV中完全保守，但在其他β冠状病毒（如SARS-CoV、MERS-CoV）中同源性低于30%，唯独与人冠状病毒OC43及犬冠状病毒CRCoV/BJ-221呈现100%一致性。

Discussion
表位³⁸⁰
YQQQDG³⁸⁵
的种间特异性分布为BCoV跨种传播提供了分子证据：其与人冠状病毒OC43的完全保守性支持"19世纪末牛传人"的进化假说，而与犬冠状病毒CRCoV的匹配则暗示牛-犬传播链的存在。这一发现不仅为冠状病毒诊断提供了高特异性靶标（可区分BCoV与其他动物冠状病毒），更揭示了N蛋白在病毒宿主适应性演化中的关键作用。

结论与意义
该研究填补了BCoV N蛋白表位研究的空白，首次报道的线性B细胞表位³⁸⁰
YQQQDG³⁸⁵
具有三重价值：

1. 诊断应用：基于该表位的检测方法可避免与其他动物冠状病毒的交叉反应；
2. 进化研究：为β冠状病毒跨种传播的分子机制提供直接证据；
3. 疫苗设计：保守表位可作为通用疫苗的候选组分。
   作者Yulong Zhou和Jiawen Zhang等强调，这一发现将推动针对人畜共患冠状病毒的"One Health"防控策略发展。