重组腺相关病毒2介导的miRNA-199抑制载体缓解葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎

本研究针对溃疡性结肠炎（UC）的治疗难题，通过重组腺相关病毒2（rAAV2）载体递送miRNA-199a-5p抑制序列，探索其在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠结肠炎模型中的治疗效果。结果表明，rAAV2经灌肠递送可高效转染结肠组织，显著抑制miRNA-199a-5p表达，降低炎症因子IL-6和TNF-α水平，并减少细胞凋亡。该研究为UC的基因治疗提供了新策略，具有重要临床转化价值。

　　

溃疡性结肠炎（UC）是一种慢性炎症性肠病，患者常面临反复发作、药物耐受和治疗手段有限的困境。近年来，微小RNA（miRNA）在炎症调控中的作用备受关注，其中miRNA-199a-5p被报道参与多种病理过程，但其在UC中的具体机制尚不明确。与此同时，基因治疗载体重组腺相关病毒（rAAV）因其低免疫原性和长效表达特性成为研究热点，但如何高效递送至结肠组织仍是技术难点。

为解决这些问题，武汉大学人民医院的研究团队在《Virus Research》发表了一项创新研究。他们构建了携带miRNA-199a-5p抑制序列的rAAV2载体，通过比较尾静脉注射、腹腔注射和灌肠三种递送方式，发现灌肠能在三周后实现结肠组织最高转染效率。在DSS诱导的小鼠UC模型中，该载体显著下调miRNA-199a-5p表达，减轻结肠缩短和病理损伤，同时降低炎症因子IL-6、TNF-α水平和细胞凋亡率。

关键技术包括：1）采用C57BL/6小鼠建立DSS诱导的UC模型；2）通过荧光显微镜和ImageJ软件量化rAAV2-eGFP转染效率；3）qRT-PCR检测miRNA-199a-5p及炎症因子表达；4）TUNEL法分析细胞凋亡。

3.1 灌肠实现rAAV高效结肠转染
通过比较不同递送方式，灌肠组三周后的荧光强度显著高于其他组（P < 0.05），且HE染色证实rAAV2未引发组织炎症。

3.2 miRNA-199a-5p抑制效果验证
PCR显示rAAV抑制组miRNA-199a-5p表达最低（P < 0.01），证实载体可有效干预目标miRNA。

3.3 炎症与凋亡改善
抑制组小鼠体重下降和疾病活动指数（DAI）显著改善（P < 0.05），结肠长度优于DSS组。IL-6和TNF-α表达降低（P < 0.05），TUNEL染色显示凋亡细胞减少。

讨论部分指出，这是首次证实rAAV2灌肠递送可安全高效转染结肠组织，且miRNA-199a-5p通过调控炎症通路影响UC进展。研究创新性地避开了基因敲除小鼠的高成本问题，为临床基因治疗提供新思路。未来需进一步探索miRNA-199a-5p的下游靶点，但其作为UC治疗靶点的潜力已得到初步验证。

该研究不仅为UC的精准治疗提供了候选靶点，还建立了可推广的rAAV结肠递送方案，对炎症性肠病及其他消化道疾病的基因治疗具有重要参考价值。