基于gelsolin互作组分析鉴定粉尘螨新型过敏原Der f 42、Der f 43和Der f 44及其临床意义

本研究针对屋尘螨（HDM）过敏原谱不全的问题，通过gelsolin互作组分析（GIA）技术，从粉尘螨（Dermatophagoides farinae）中鉴定出3种新型过敏原Der f 42（钠钾ATP酶β2亚基）、Der f 43（过氧化物还原酶1）和Der f 44（过氧化物还原酶2），其IgE结合率分别为7.2%、8.5%和6.7%。该研究为HDM过敏的精准诊断提供了新靶点，并建立了基于细胞骨架蛋白互作网络的过敏原发现新策略。

　　

研究背景与意义
屋尘螨（HDM）是全球过敏性疾病的头号元凶，其分泌的蛋白质中已有41组被WHO/IUIS认定为过敏原。然而，传统方法依赖IgE结合筛选和蛋白质纯化，难以覆盖低丰度组分，导致约20%患者无法通过现有过敏原检测确诊。更棘手的是，细胞骨架蛋白（如肌动蛋白调节蛋白gelsolin）因高度保守性可能引发交叉反应，但这类蛋白在HDM过敏中的作用仍是谜团。广州医科大学附属第一医院的研究团队独辟蹊径，以gelsolin为"分子诱饵"，开发了gelsolin互作组分析（GIA）技术，成功捕获到3个新型过敏原，论文发表于《World Allergy Organization Journal》。

关键技术方法
研究采用重组gelsolin亲和树脂富集粉尘螨提取物中的结合蛋白，通过LC-MS/MS鉴定出14种gelsolin结合蛋白（GBPs）。从阳性候选蛋白中克隆出4种新型蛋白基因（Na_K-ATPase β2、Prx1、Prx2、CFGA），在大肠杆菌表达系统制备重组蛋白。采用ELISA、Western blot和dot-blot分析125-143例HDM过敏患者血清的IgE结合活性，并与健康对照比较。

研究结果
1. gelsolin互作组分析
LC-MS/MS鉴定出14种GBPs，包含10种已知过敏原（如Der f 1、Der f 2等）和4种新候选蛋白。免疫印迹证实78%过敏患者血清能识别GBPs组分（p < 0.01）。

2. 新型过敏原鉴定
三种重组蛋白显示特异性IgE结合：

• Der f 42（Na_K-ATPase β2）：7.2%阳性率（9/125），Western blot证实含线性表位
• Der f 43（Prx1）：8.5%阳性率（12/143），仅dot-blot阳性提示构象表位
• Der f 44（Prx2）：6.7%阳性率（6/90），兼具线性和构象表位
  CFGA无IgE结合活性被排除。

3. 互作验证
Pull-down实验证实三种新过敏原均能与gelsolin直接结合，暗示细胞骨架网络参与过敏反应。

结论与意义
该研究开创性地将互作组学引入过敏原发现领域，GIA技术相比传统方法展现93.3%的检出效率。Der f 42/43/44的发现完善了HDM过敏原谱，尤其为对常规检测阴性的患者提供了诊断新靶点。值得注意的是，Der f 43仅通过构象表位引发IgE反应的现象，提示天然构象保持对这类过敏原检测至关重要。研究还首次揭示gelsolin与过敏原的潜在功能关联，为探索细胞骨架蛋白在过敏中的免疫调节作用开辟了新方向。未来需进一步解析这些蛋白的三维结构，并开发包含新过敏原的组分解析诊断（CRD）试剂，推动HDM过敏的精准医疗发展。