circ-NOLC1通过调控miR-330-5p-PALM信号轴抑制宫颈癌发展的分子机制研究

本研究针对宫颈癌(CC)治疗靶点匮乏的临床难题，揭示了环状RNA circ-NOLC1通过ceRNA机制吸附miR-330-5p上调PALM表达，从而抑制肿瘤增殖迁移并促进凋亡的新机制。研究人员通过生物信息学筛选和功能实验验证，首次阐明circ-NOLC1/miR-330-5p/PALM轴在CC中的抑癌作用，为开发新型诊断标志物和靶向治疗策略提供理论依据。

　　

宫颈癌作为全球女性第二大妇科恶性肿瘤，每年新增病例约50万例，其发病与高危型HPV感染密切相关。尽管HPV疫苗和筛查手段不断进步，但晚期患者治疗选择仍局限，亟需探索新的分子靶点。环状RNA(circRNA)作为新兴非编码RNA，通过竞争性吸附microRNA(miRNA)的ceRNA机制参与肿瘤调控，但在宫颈癌中的作用网络尚未完全解析。衡水市人民医院的研究团队通过分析GSE113696数据集，发现hsa_circ_0019686(命名为circ-NOLC1)在宫颈癌中显著低表达，进而系统揭示了其通过miR-330-5p/PALM信号轴抑制肿瘤发展的分子机制，相关成果发表于《Hereditas》。

研究采用GEO2R筛选差异表达circRNA，通过RT-qPCR验证circ-NOLC1在4种宫颈癌细胞系(HeLa、CaSki、C-33A、SW756)中的表达；利用RNase R消化实验证实其环状结构；通过亚细胞定位分析明确其胞质分布特征。功能研究采用CCK-8、划痕愈合、Transwell和流式细胞术分别检测增殖、迁移、侵袭和凋亡；建立裸鼠移植瘤模型评估体内抑瘤效果。机制研究结合生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证circ-NOLC1与miR-330-5p、miR-330-5p与PALM 3'-UTR的靶向关系，并通过RIP实验证实AGO2介导的RNA诱导沉默复合体结合。

circ-NOLC1在宫颈癌细胞中低表达
通过GEO数据集分析发现circ-NOLC1在宫颈癌组织显著下调(adj.PVal=0.000246)，RT-qPCR证实其在宫颈癌细胞系表达量较正常宫颈上皮细胞(HcerEpiC)降低59-80%(P<0.001)。RNase R耐受实验显示其对RNA酶的抗性，而线性NOLC1被降解76%(P<0.001)，证实其稳定环状结构。亚细胞分离实验表明circ-NOLC1主要定位于胞质，提示其可能通过ceRNA机制发挥作用。

circ-NOLC1过表达抑制肿瘤恶性表型
在HeLa和CaSki细胞中过表达circ-NOLC1使增殖能力下降34-41%(P<0.001)，迁移能力降低58-66%(P<0.01)，侵袭能力减弱57%(P<0.01)，同时凋亡率增加3.8-4.4倍(P<0.001)。裸鼠实验中，circ-NOLC1过表达使肿瘤体积缩小47%(P<0.001)，重量减轻58%(P<0.01)，免疫组化显示Ki67和MMP9蛋白表达显著抑制。

circ-NOLC1作为miR-330-5p分子海绵
生物信息学预测发现circ-NOLC1与miR-330-5p存在结合位点，双荧光素酶报告基因证实突变结合位点后荧光活性恢复(P<0.01)。RIP实验显示circ-NOLC1和miR-330-5p在AGO2复合体中富集。TCGA数据分析显示miR-330-5p在宫颈癌组织高表达(P=1.62×10^-12
)，实验验证其在宫颈癌细胞表达量升高4.3-4.8倍(P<0.001)。

miR-330-5p靶向调控PALM表达
TargetScan预测PALM为miR-330-5p靶基因，其3'-UTR存在保守结合位点。双荧光素酶实验证实miR-330-5p mimic可抑制野生型PALM报告载体活性(降低60-67%,P<0.01)。PALM在宫颈癌组织表达显著降低(P=2.15×10^-10
)，细胞实验验证其mRNA水平下降73-80%(P<0.001)。

circ-NOLC1通过miR-330-5p/PALM轴发挥抑癌作用
挽救实验显示，共转染miR-330-5p mimic可逆转circ-NOLC1过表达对宫颈癌细胞的影响：增殖抑制率从41%降至16%(P<0.001)，迁移抑制率从66%降至28%(P<0.001)，同时凋亡促进作用被削弱。分子水平上，miR-330-5p mimic使PALM表达量下降51-57%(P<0.001)，证实该信号轴的调控关系。

该研究首次阐明circ-NOLC1作为肿瘤抑制因子，通过吸附miR-330-5p解除其对PALM的抑制作用，从而抑制宫颈癌细胞增殖迁移并促进凋亡。这不仅拓展了对circRNA在宫颈癌中调控网络的认识，更为重要的是，circ-NOLC1/miR-330-5p/PALM轴的发现为开发新型诊断标志物和靶向治疗策略提供了理论依据。研究采用的多种宫颈癌细胞系和裸鼠模型增强了结论的可靠性，但临床样本验证和小样本量的动物实验仍需后续完善。值得注意的是，与circ-NOLC1在上皮性卵巢癌中的促癌作用相反，其在宫颈癌呈现抑癌效应，这种组织特异性调控机制值得深入探究。未来研究可进一步解析PALM下游信号通路，并开发基于该轴的靶向干预策略。