马属动物IL-1β高灵敏度夹心ELISA检测技术的开发与验证

本研究针对马属动物炎症诊断中IL-1β检测技术的局限性，开发了基于单克隆抗体（mAbs 3G8/5G3）的高灵敏度夹心ELISA方法。该技术可同时检测马和驴血清样本中的IL-1β（检测范围200-10,000 pg/mL），其重复性与商业试剂盒相当（CV<5%），且对IL-1α、IL-1Ra等炎症介质无交叉反应。特别突破性地解决了现有商业试剂对驴样本检测灵敏度不足的问题，为马属动物炎症性疾病诊断提供了可靠工具。

　　

马属动物炎症监测的新利器
在兽医临床中，白细胞介素-1β（IL-1β）作为核心炎症介质，其检测对马属动物疾病诊断至关重要。然而现有商业ELISA试剂对驴样本存在高假阴性率，且马属动物IL-1β检测缺乏标准化方法。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的Saiwen Ma、Xing Guo等研究人员在《Animal Diseases》发表研究，通过创新性开发双单克隆抗体（mAbs 3G8/5G3）建立的夹心ELISA技术，成功突破了这一技术瓶颈。

关键技术方法
研究团队采用KLH偶联肽段和纯化IL-1β蛋白分别免疫BALB/c小鼠制备单抗，通过杂交瘤技术筛选出高特异性抗体对（捕获抗体3G8，检测抗体生物素化5G3）。优化后的ELISA体系使用84份马血清和24份驴血清验证性能，并与商业试剂盒（R&D DY3340）平行比对。所有样本均来自实验室建立的EHV-1感染模型和自然感染的沙门氏菌流产驴。

研究结果
Production of monoclonal antibodies against equine IL-1β
通过Western blot验证mAbs可识别17 kDa（成熟IL-1β）和37 kDa（前体）条带，且与IL-1α、IL-1Ra等无交叉反应（

）。

Optimization of assay conditions
确定最佳条件：包被浓度7.5μg/mL，生物素化抗体稀释1:500，HRP-链霉亲和素1:1,000，检测限低至143 pg/mL（

）。

Reliability
批内/批间变异系数均<5%，马血清检测与商业试剂总符合率达91.67%，而驴样本中商业试剂全部假阴性（表3-4）。

Application in infection models
在EIAV感染模型中，IL-1β水平从92 pg/mL升至1,252 pg/mL；EHV-1感染马血清IL-1β波动与发热、病毒载量变化同步（

）。

结论与意义
该研究首次建立适用于马和驴的双物种IL-1β检测标准，其灵敏度较商业试剂提升10倍以上。技术突破主要体现在：（1）抗体特异性覆盖马/驴IL-1β保守表位；（2）临床样本验证显示对慢性炎症（如沙门氏菌感染）的监测优势；（3）为马属动物NLRP3炎症小体（NLRP3 inflammasome）通路研究提供工具。这项发表于《Animal Diseases》的成果，填补了马科动物精准医疗领域的关键技术空白。