基于TLC动态监测的梯度洗脱硅胶柱色谱法高效纯化乳源鞘磷脂新策略

针对传统鞘磷脂(SM)纯化方法纯度低、损耗高、溶剂用量大等问题，江南大学团队开发了TLC-ImageJ动态监测的梯度洗脱硅胶柱色谱法。通过优化展开剂(甲基乙酸酯-异丙醇-氯仿-甲醇-KCl系统)和洗脱条件(双相梯度洗脱系统)，实现SM纯度达90%(摩尔比)，回收率超85%，为食品、医药领域高纯度SM的规模化制备提供新方案。

　　

鞘磷脂(Sphingomyelin, SM)作为细胞膜脂筏的关键组分，在神经髓鞘形成、细胞信号传导和药物递送等领域具有重要价值。然而，天然SM在蛋黄、乳制品中含量极低，传统纯化方法如溶剂萃取、柱色谱等存在纯度不足70%、溶剂消耗大、操作繁琐等瓶颈。尤其在高纯度SM需求激增的背景下，开发高效低成本的纯化技术成为食品、化妆品和制药行业的迫切需求。

针对这一挑战，江南大学的研究团队创新性地将薄层色谱(TLC)动态监测技术与梯度洗脱硅胶柱色谱相结合，建立了乳源鞘磷脂的一步式纯化方案。该成果发表于《Journal of Chromatography B》，通过系统性优化展开剂组成、样品载量和柱体尺寸参数，实现了SM纯度与收率的双重突破。

研究采用三大关键技术：(1) TLC-ImageJ联用定量分析，建立甲基乙酸酯-异丙醇-氯仿-甲醇-0.25% KCl(25:25:25:10:9)展开体系；(2) 双相梯度洗脱系统，先后使用甲基乙酸酯-异丙醇-二氯甲烷-甲醇-水(25:25:25:10:11)和二氯甲烷-甲醇-水(45:30:8.5)洗脱；(3) ³¹
P NMR和UPLC-MS/MS对产物进行结构验证。实验原料采用新西兰恒天然公司提供的牛乳磷脂(MPL)。

【材料与方法】
团队首先筛选了6种展开剂系统，发现含KCl的混合溶剂能有效分离SM与其他磷脂(PE/PC/PS)，最佳点样量为50-75μg MPL。通过ImageJ软件定量分析，该方法精密度RSD<5%，检测限(LOD)达0.15μg。

【洗脱条件优化】
关键突破在于设计双梯度洗脱程序：第一阶段洗脱剂极性适中，可去除大部分杂质；第二阶段提高极性专一性洗脱SM。当硅胶载样量3.125-3.75mg/g、柱高径比1:5-1:6时，SM回收率稳定在85%以上。

【结构验证】
³¹
P NMR证实产物纯度达90%(摩尔比)，UPLC-MS/MS分析显示其富含C20以上长链饱和脂肪酸，这与SM的生理功能高度契合。相较文献报道的多次柱层析法，新方法溶剂用量减少40%，操作时间缩短60%。

该研究的意义在于：首次将TLC动态监控引入SM工业化纯化，通过实时监测优化洗脱终点，避免了传统方法的盲目性；建立的ImageJ定量分析方法为脂质研究提供新工具；所得高纯度SM的长链脂肪酸特征，为其在神经保护制剂和靶向递药系统的应用奠定物质基础。尽管仍需解决有机溶剂回收问题，但该方法已为天然SM的大规模制备提供了可靠的技术路径。