化学诱导肝脏祖细胞移植联合再生刺激在低白蛋白血症大鼠模型中的治疗潜力与免疫挑战

本研究针对代谢性肝病治疗中成熟肝细胞(HEP)来源受限的难题，探索了化学诱导肝脏祖细胞(CLiP)移植联合门静脉分支结扎(PBL)再生刺激的治疗策略。通过Nagase低白蛋白血症大鼠(NAR)模型发现，尽管CLiP在体外具有强增殖能力，但其体内因DR5/TRAIL通路介导的先天免疫攻击未能分化为功能性肝细胞，揭示了肝祖细胞临床应用面临的免疫屏障问题。

　　

肝脏作为人体重要的代谢器官，其功能衰竭或遗传缺陷会导致严重的疾病。目前，成熟肝细胞(HEP)移植是治疗代谢性肝病的重要策略，但面临供体短缺和移植后细胞增殖受限两大瓶颈。虽然通过门静脉分支结扎(PBL)等再生刺激可增强HEP的体内扩增，但如何获得足够数量且具有增殖潜力的替代细胞仍是未解难题。

针对这一挑战，来自长崎大学的研究团队将目光投向化学诱导肝脏祖细胞(CLiP)——这种通过小分子化合物组合(ROCK抑制剂、TGF-β1抑制剂和GSK3抑制剂)从成熟肝细胞重编程获得的前体细胞，在体外展现出优于HEP的增殖能力和双向分化潜能。研究人员假设，CLiP移植联合PBL再生刺激可能成为更优的治疗方案，相关成果发表在《Regenerative Therapy》。

研究采用三项关键技术：1) 通过胶原酶灌注法从Sprague Dawley大鼠分离HEP并重编程为CLiP；2) 在Nagase低白蛋白血症大鼠(NAR)模型中实施区域性CLiP移植联合PBL手术；3) 利用GFP标记细胞示踪结合DR5/TRAIL免疫组化分析移植细胞的免疫微环境。

研究结果部分：
3.1. CLiP的特征验证
免疫荧光显示培养14天的CLiP高表达CK19和Ki67但白蛋白阴性，流式检测到CD24⁺
标志，PCR证实其EpCAM和PCNA高表达而Albumin低表达，符合肝脏祖细胞特征。

3.2. 移植CLiP的白蛋白合成能力
在NAR模型中，HEP移植组血清白蛋白水平短期内显著升高且PBL可增强该效应，而CLiP组始终未见提升。免疫组化显示CLiP被TRAIL⁺
细胞包围，且其表面DR5表达高于HEP，提示天然免疫攻击可能是功能丧失的主因。

3.3. GFP标记细胞的归巢分析
移植24小时内，CLiP已在门静脉内被TRAIL阳性细胞包围，而HEP周围未见明显免疫浸润，证实CLiP存在独特的免疫原性弱点。

讨论与结论指出，尽管CLiP在体外对HGF等生长因子响应良好，但其体内对再生刺激的反应远逊于HEP，主要原因可能包括：1) 生长因子受体表达不成熟；2) PBL时机与强度不足；3) 高表达DR5导致的先天免疫清除。该研究首次揭示CLiP临床应用面临的免疫屏障问题，为优化肝祖细胞治疗策略提供了关键理论依据——未来或需通过基因编辑降低DR5表达，或采用更强效的免疫抑制方案来突破这一瓶颈。