玻璃化冷冻条件对青春期前小鼠卵母细胞遗传与功能完整性的影响研究

为解决青春期前癌症患者生育力保存中卵母细胞体外成熟(IVM)和玻璃化冷冻技术效果不佳的问题，研究人员系统评估了不同平衡时间(10/15分钟)和温度(24°C/37°C)对青春期前小鼠卵母细胞存活率、线粒体膜电位(JC-1)、纺锤体结构、DNA完整性(γ-H2AX)及纺锤体检查点转录本(Bub1/Mad2)的影响。研究发现37°C平衡会显著降低卵母细胞存活率和成熟潜力，增加DNA双链断裂风险，提示需针对青春期前个体优化冷冻方案。该成果为儿童癌症幸存者的个性化生育力保存提供了重要理论依据。

　　

在儿童癌症治疗领域，卵巢组织冷冻保存(OTC)虽是青春期前女孩生育力保存的金标准，但存在移植后肿瘤复发的风险。卵母细胞体外成熟(IVM)联合玻璃化冷冻成为潜在替代方案，但现有技术对成人卵母细胞效果尚不理想，而青春期前卵母细胞因结构功能差异（如体积小、能量代谢低、微管修饰弱）可能对冷冻条件更为敏感。目前关于温度和时间参数对这类卵母细胞影响的系统性研究仍属空白。

为填补这一空白，来自卡斯特巴医学院的研究团队以2周龄瑞士白化小鼠为模型，设计了9组实验：对照组（非冷冻IVM）、GV期卵母细胞先冷冻后成熟(GVV)和IVM后MII期卵母细胞冷冻(MIIV)两组，分别在不同温度(24°C/37°C)和时间(10/15分钟)下平衡。研究采用JC-1荧光染色评估线粒体膜电位，免疫荧光染色分析纺锤体结构(α-tubulin/DAPI)，γ-H2AX免疫定位检测DNA损伤，qPCR定量纺锤体检查点基因(Bub1/Mad2)表达，并通过锶激活实验评估发育潜能。

研究结果显示：37°C平衡15分钟的GVV组成熟率显著降低(P<0.01)，而MIIV组在37°C下存活率普遍下降(P<0.05)。线粒体功能方面，24°C平衡10分钟的MIIV组JC-1比率显著优于15分钟组(P<0.01)。纺锤体异常率在37°C/15分钟平衡的MIIV组最高(P<0.05)，表现为微管紊乱和染色体错位。DNA损伤分析发现，37°C平衡组γ-H2AX焦点≥15个的比例显著升高(最高达36.3%，P<0.01)，且MIIV组较GVV组更易受损。

讨论部分指出，与成人卵母细胞不同，青春期前卵母细胞在37°C平衡时更易受渗透压骤变影响，这可能与其独特的膜通透性和能量代谢特征有关。研究首次证实短期(10分钟)24°C平衡能最大限度保持线粒体功能，而GV期冷冻策略可减少纺锤体损伤。这些发现为优化儿童生育力保存方案提供了关键参数，但后续需验证受精和胚胎发育潜力。论文发表于《Reproductive Biology》，为临床制定年龄特异性的冷冻程序奠定了重要基础。