东北虎源猫泛白细胞减少症病毒新毒株的分离鉴定及其NS1蛋白介导的凋亡机制与诊断技术开发

本研究针对濒危东北虎(Panthera tigris altaica)面临的猫泛白细胞减少症病毒(FPV)威胁，成功从虎粪样本中分离鉴定出新毒株FPV-HER-NEFU，并基于重组NS1蛋白开发出高灵敏度(1:3200)间接ELISA检测方法。研究发现FPV通过上调Caspase-9/Caspase-3/Bax、下调Bcl-2诱导线粒体凋亡，为野生猫科动物FPV防控提供了新型诊断工具和理论基础。

　　

在广袤的东北林海中，威风凛凛的东北虎正面临着一个隐形杀手的威胁——猫泛白细胞减少症病毒(FPV)。这种微小却致命的病原体，能在虎群中引发高达90%的死亡率，幼虎尤其易感。更令人担忧的是，俄罗斯远东地区68%的野生东北虎体内检测到FPV抗体，而我国东北圈养虎群也出现4.6%的感染率。传统诊断方法如电镜和PCR耗时费力，难以满足野外监测需求，而现有疫苗对野生种群保护力有限。面对这一困境，东北林业大学的研究团队展开攻关，其成果发表在《Research in Veterinary Science》上。

研究团队采用多学科交叉策略：从256份东北虎粪便样本中分离病毒；克隆NS1基因至pGEX-6P-1载体并在E. coli Rosetta(DE3)中表达；通过GST亲和层析纯化蛋白并优化ELISA条件；利用F81细胞系探究凋亡机制。这些技术手段为后续发现奠定基础。

在"Identification of FPV from Amur tiger samples"部分，研究团队通过FPV特异性引物扩增出750 bp特征片段，经测序比对确认新毒株FPV-HER-NEFU，系统进化分析显示其与犬细小病毒(CPV)存在明显差异。

"Development of indirect ELISA"详细阐述了基于重组NS1蛋白的诊断技术突破。该ELISA与貂阿留申病病毒、犬细小病毒等无交叉反应，灵敏度达1:3200稀释度，为野外筛查提供可靠工具。

最关键的"Mechanistic studies"揭示：FPV-HER-NEFU感染通过线粒体途径诱发凋亡——Bcl-2蛋白表达下调，促凋亡因子Bax上调，细胞色素c(Cytc)释放，最终激活Caspase-9和Caspase-3级联反应。这一发现首次在东北虎源FPV中证实了与非结构蛋白NS1相关的凋亡通路。

讨论部分强调，该研究首次系统解析东北虎源FPV的分子特征和致病机制。所建立的NS1-ELISA方法可实现无创监测，对野生猫科动物保护具有重要实践价值。凋亡通路的阐明为开发靶向药物提供新思路，如通过调节Bcl-2家族蛋白活性可能减轻FPV致病性。

这项研究不仅填补了珍稀野生动物病毒学研究空白，更开创性地将基础研究与临床需求结合。从病毒分离到诊断技术开发，从分子机制解析到应用转化，为东北虎等濒危物种的疫病防控构建了完整研究框架，对全球大型猫科动物保护具有示范意义。