寿司与生鲜蔬菜中三种弓形杆菌的检测：基于培养与分子生物学技术的整合方法

为解决食源性病原体弓形杆菌(Arcobacter spp.)在食品监测中的漏检问题，意大利卫生部资助团队开发了整合培养法、实时荧光定量PCR(real-time PCR)、多重PCR(mPCR)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)的检测方案。该研究首次在寿司中检出致病性弓形杆菌，证实该方法对A. butzleri、A. cryaerophilus和A. skirrowii的检测具有高灵敏度，为食品安全风险防控提供了新工具。

　　

在生鱼片寿司和沙拉里潜藏着一种鲜为人知的危险——弓形杆菌(Arcobacter)。这种被国际食品微生物标准委员会(ICMSF)列为"严重危害级"的病原体，能引发腹痛、发热甚至败血症，更棘手的是它对β-内酰胺类、氟喹诺酮类和大环内酯类抗生素普遍耐药。尽管全球34种弓形杆菌中，A. butzleri、A. cryaerophilus和A. skirrowii造成了绝大多数感染，但食品行业却缺乏强制检测标准，导致临床诊断时往往漏检。更令人担忧的是，这种微生物能在食品加工环境中形成生物膜，抵抗消毒剂，通过即食食品直接威胁人类健康。

针对这一现状，意大利卫生部资助的研究团队在《Food Microbiology》发表论文，开发了一套创新检测方案。研究人员选取了风险较高的寿司和生鲜蔬菜作为检测对象，采用"预富集培养+分子筛查"的策略：先用选择性培养基富集样本中的微生物，随后通过优化的实时荧光定量PCR(real-time PCR)进行初筛，阳性样本进一步用多重PCR(mPCR)鉴定菌种，最终通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)确认。

Assay optimization
研究团队首先优化了针对23S rRNA基因的实时荧光定量PCR体系，发现0.3 μM的引物浓度即可有效扩增233-bp靶片段，检测限达2.5 ng DNA/反应。通过调整退火温度和循环参数，建立了稳定检测体系。

Genus-specific real-time PCR optimization
对比实验显示，该PCR方法对三种目标菌株的Ct值差异小于1.5个循环，电泳检测灵敏度与测序结果100%吻合。特别设计的内部对照系统可有效排除食品基质抑制效应。

Discussion
在102份寿司和89份蔬菜样本中，该方法检出率比传统培养法提高32%。值得注意的是，酸性蔬菜样本需调整pH至7.2±0.2才能获得最佳富集效果。研究首次在意大利市售寿司中检出A. butzleri（阳性率4.9%），蔬菜中A. cryaerophilus阳性率达7.8%。

Conclusions
该研究证实整合分子生物学与培养学的方法能显著提升弓形杆菌检出效率，将检测周期从传统方法的72-96小时缩短至48小时。特别开发的预富集培养基成功模拟了细菌原始生态环境，克服了食品基质的干扰。这些发现为建立标准化检测流程提供了关键数据，对保障即食食品安全具有重要实践价值。

论文同时指出，当前需要优化培养基配方以区分活菌/死菌，并建议将弓形杆菌纳入食品微生物常规监测体系。这项工作由Eleonora Scoccia、Giuliana Blasi等学者合作完成，Giulia Amagliani担任通讯作者，研究经费来自意大利卫生部专项（RC 13/2020）。