BEZ235介导PI3K/mTOR双重抑制改善卵巢组织冷冻移植中卵泡存活：临床前模型研究

本研究针对卵巢组织冷冻保存与自体移植(OTCTP)后卵泡大量丢失的临床难题，创新性地采用PI3K/mTOR双重抑制剂BEZ235，通过小鼠模型证实其能有效抑制Akt/mTOR通路激活，显著提高原始卵泡保存率（较对照组提升50%），且优于单通路抑制剂雷帕霉素。该成果为延长移植卵巢功能持续时间、优化女性生育力保存策略提供了新靶点。

　　

研究背景
随着肿瘤治疗技术的进步，年轻女性癌症幸存者的生育力保存需求日益凸显。卵巢组织冷冻移植(OTCTP)虽是青春期前患者的唯一选择，但移植后卵泡因缺血和异常激活导致的"燃尽"现象，使得70%的原始卵泡在移植后迅速耗竭。既往研究表明，PI3K/PTEN/Akt和mTOR通路是调控卵泡休眠的关键，但单通路抑制剂雷帕霉素存在反馈激活Akt的缺陷。

比利时列日大学Carine Munaut团队在《Reproductive Biology and Endocrinology》发表研究，首次将抗癌药物BEZ235（已完成II期临床试验的PI3K/mTOR双重抑制剂）应用于生育力保存领域。通过系统比较BEZ235与雷帕霉素、LY294002等抑制剂在体外培养、冷冻保存和移植模型中的效果，发现BEZ235能同步阻断两条通路，使移植3周后原始卵泡比例较对照组显著提高（p≤0.05），且无需联合血管生成因子辅助。

关键技术方法
研究采用4-7日龄和4周龄C57BL/6小鼠卵巢，建立三级实验体系：①器官型培养模型评估化疗药物4-HC诱导的卵泡激活；②慢速冷冻保存实验比较不同抑制剂对Akt(pSer⁴⁷³)/Rps6(pSer^240/244)通路的抑制效果；③肾包膜下自体移植模型观察移植后卵泡存活。关键技术包括Western blot检测通路蛋白、DDX4/Ki67免疫组化定量卵泡、天狼星红染色评估纤维化。

研究结果

BEZ235在器官型培养中双重抑制化疗诱导的通路激活
Western blot显示：1μM BEZ235使4-HC处理的卵巢pAkt/Akt和pRps6/Rps6比值分别降低60%和55%（p≤0.05），而雷帕霉素仅抑制mTOR通路，LY294002仅靶向PI3K。

冷冻保存中BEZ235独特保护作用
在4-7日龄卵巢冷冻液中添加BEZ235，解冻后pAkt和pRps6水平较对照组下降70%（p≤0.01），而雷帕霉素组出现Akt反馈激活现象。

BEZ235优于抗苗勒管激素(AMH)的卵泡保护
200 ng/ml AMH虽改善卵泡形态（健康卵泡比例提高35%），但1μM BEZ235使原始卵泡比例达78%，且联合AMH未产生协同效应。

移植模型中BEZ235维持卵泡库
移植3周后，BEZ235冷冻组原始卵泡占比（42%）显著高于对照组（28%）和雷帕霉素组（31%），Ki67阳性卵泡减少50%（p≤0.05），且pAkt阳性卵泡仅5%。

血管生成因子无协同效应
VEGF₁₆₅(8μg/kg)联合G-CSF(50μg/kg)注射虽提升对照组原始卵泡至35%，但对BEZ235组无叠加效果（p>0.05）。

结论与意义
该研究首次证实：①BEZ235通过同步抑制PI3K/mTOR通路，阻断冷冻移植过程中的"双通路激活陷阱"；②其效果优于临床常用的AMH和雷帕霉素；③为简化OTCTP流程提供可能——单次冷冻添加即可替代术后反复给药。值得注意的是，BEZ235作为已进入肿瘤临床试验的化合物，其生殖系统安全性数据将加速临床转化。未来需在灵长类模型中验证其对卵母细胞质量的影响，并探索与低温保护剂的协同作用。