银杏叶总黄酮通过TLR4/PI3K信号通路调控LPS诱导的人冠状动脉内皮细胞炎症与自噬的机制研究

本研究针对动脉粥样硬化中内皮细胞炎症损伤与自噬失衡的关键病理环节，探讨银杏叶总黄酮(GBF)通过靶向TLR4/PI3K信号通路对LPS诱导的人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)的保护机制。研究人员通过体外实验证实，GBF能剂量依赖性清除DPPH·、ABTS+和·OH自由基，显著抑制LPS诱导的IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子释放，同时通过下调LC3B II/I和Beclin1蛋白表达逆转过度自噬。该研究首次揭示GBF通过TLR4/PI3K轴双向调控炎症与自噬的协同作用，为心血管疾病干预提供新策略。

　　

动脉粥样硬化作为心血管疾病的共同病理基础，其发病机制与血管内皮慢性炎症和自噬失衡密切相关。当细菌内毒素脂多糖(LPS)激活Toll样受体4(TLR4)时，会过度刺激PI3K/Akt/mTOR通路，既促进NF-κB介导的炎症因子风暴，又扰乱自噬稳态——这种双重打击加速了斑块不稳定性。虽然银杏叶提取物在脑血管保护方面研究较多，但其主要活性成分总黄酮(GBF)对冠状动脉内皮的保护机制，尤其是能否通过TLR4/PI3K这一"炎症-自噬"调控枢纽发挥作用，仍是未解之谜。

为回答这一问题，国内研究人员在《Journal of Radiation Research and Applied Sciences》发表论文，首次系统阐释GBF通过TLR4/PI3K通路协调调控内皮细胞炎症与自噬的分子机制。研究采用酶辅助溶剂法提取GBF（含0.59%槲皮素、山奈酚等），通过CCK-8检测细胞活力、流式细胞术分析凋亡、ELISA测定炎症因子、免疫荧光标记LC3B蛋白，并结合Western blot检测TLR4/PI3K通路关键蛋白表达。

3.1 提取与检测
HPLC证实GBF主要含槲皮素(0.32%)、山奈酚(0.18%)和异鼠李素(0.09%)，对DPPH·、ABTS⁺和·OH的IC₅₀分别为0.65、0.12和0.38 mg/mL，显示强抗氧化能力。

3.3 细胞增殖
LPS使HCAECs存活率降至52.3%，而100 μg/mL GBF可恢复至89.7%，呈现剂量依赖性保护。

3.4 细胞凋亡
LPS组凋亡率达28.5%（早期15.3%+晚期13.2%），高剂量GBF(HD-GBF)可降至9.7%，优于阳性对照Z-VAD-FMK(6.5%)。

3.5 炎症反应
GBF预处理使LPS诱导的IL-6分泌减少65%，并显著抑制IL-8、TNF-α mRNA表达，24小时仍保持持续抗炎效果。

3.6 自噬调控
免疫荧光显示LPS使LC3B斑点增加2.8倍，HD-GBF组仅1.3倍；Western blot证实GBF剂量依赖性降低LC3B II/I比值和Beclin1表达，但不同于氯喹的完全抑制，体现"再平衡"特性。

3.7 通路机制
GBF显著下调TLR4和磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白表达，提示其通过阻断TLR4/PI3K轴实现"抗炎-调自噬"双效协同。

这项研究创新性发现：GBF能选择性抑制LPS诱导的过度自噬而保留基础自噬功能，通过TLR4/PI3K通路降低炎症因子释放（IL-6降幅达65%）、减少细胞凋亡（从28.5%降至9.7%）、恢复LC3B II/I平衡（降幅62%）。该机制为解释GBF抗动脉粥样硬化作用提供了新视角——不同于传统抗氧化途径，GBF通过靶向"炎症-自噬"交叉通路发挥内皮保护作用。尽管100 μg/mL的体外浓度高于人体血浆水平，但研究揭示的TLR4/PI3K靶点为开发纳米递送系统优化给药方案奠定了理论基础，也为心血管疾病干预提供了新型多靶点策略。