合成NKG2D受体（SNR）装甲的CAR-T细胞攻克实体瘤抗原异质性难题

本研究创新性构建合成NKG2D受体（SNR）装甲的CLDN18.2 CAR-T细胞，通过靶向NKG2D配体（NKG2DLs）克服实体瘤抗原异质性。实验证实SNR CAR-T可协同激活DAP10/DAP12信号通路，增强肿瘤浸润性，减少T细胞耗竭标志物（PD-1/LAG3），提升记忆表型（TCF7+/CD62L+），在胃癌/胰腺癌PDX模型中实现显著肿瘤消退。

　　

引言

嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法在血液肿瘤中成效显著，但实体瘤治疗面临抗原异质性和免疫抑制微环境（TME）的双重挑战。Claudin 18.2（CLDN18.2）作为胃癌（GC）和胰腺癌（PC）的潜在靶点，其表达不均（仅38%胃癌患者阳性）限制疗效。自然杀伤细胞受体NKG2D的配体（NKG2DLs，如MICA/B和ULBP家族）在应激状态下广泛表达于肿瘤细胞和TME组分，为协同靶向提供新思路。

结果

2.1 实体瘤中CLDN18.2的异质性表达

组织微阵列分析显示，胃癌组织中CLDN18.2呈斑片状分布，而NKG2DLs（ULBP1/4）普遍表达。PDX模型中发现，CLDN18.2 CAR-T治疗后残留肿瘤仍高表达NKG2DLs，提示双靶向策略的必要性。

2.2 SNR CAR-T的体外双靶向杀伤

设计的合成NKG2D受体（SNR）包含NKG2D胞外域与DAP10/DAP12信号域，通过2A肽与CLDN18.2 CAR串联。在CLDN18.2阴性但NKG2DLs高表达的A431/RKO混合模型中，SNR CAR-T对30%抗原阳性细胞的杀伤率较传统CAR-T提升2倍（p<0.01），且细胞因子（IFN-γ/TNF-α）分泌适度，避免细胞因子风暴风险。

2.3 记忆表型增强与耗竭减少

转录组分析揭示SNR CAR-T中记忆相关基因（TCF7/LEF1）上调，耗竭标志物（PD-1/CTLA-4）下调。质谱流式（CyTOF）显示CD8⁺ T细胞中CD62L⁺/CD45RA⁺亚群增加50%，而CD39⁺终末耗竭细胞减少。

2.4 同源模型中的疗效突破

在CLDN18.2均一表达的NUGC4-Luc异种移植模型中，SNR CAR-T实现100%完全缓解（vs 传统CAR-T的60%）。胰腺癌MIA-Paca2模型显示SNR CAR-T显著提升T细胞扩增（外周血CAR⁺细胞增加3倍）和肿瘤浸润（Ki67⁺细胞增加2倍）。

2.6 克服异质性的体内验证

7:3混合A431异种模型中，SNR CAR-T使肿瘤体积缩小70%（p<0.001），而传统CAR-T无效。PDX模型进一步证实SNR CAR-T可清除CLDN18.2低表达（<40%）的肿瘤克隆。

2.7 免疫健全模型的安全性

C57BL/6小鼠Panc02-m18.2模型中，SNR CAR-T降低Gr-1⁺ MDSC比例40%，减少CD31⁺新生血管厚度。病理检查显示仅肺部轻微炎症浸润，无器官损伤。

讨论

SNR CAR-T通过DAP10介导的PI3K-Vav通路促进记忆形成，DAP12的ITAM基序增强持续性杀伤。其独特之处在于：

1. 靶向谱拓宽：覆盖CLDN18.2^low/NKG2DLs^high肿瘤细胞；
2. 微环境重塑：减少MDSC和血管生成；
3. 安全性：未观察到NKG2D在肠道上皮的on-target/off-tumor毒性。

结论

该研究为实体瘤提供了一种克服抗原异质性的通用型CAR-T设计范式，临床转化潜力显著。未来需探索SNR在组合疗法中的应用及长期安全性。