外源性激素重复给药对濒危蛙类（Litoria aurea）精子数量与质量的负面影响研究

为优化濒危两栖动物辅助生殖技术，澳大利亚墨尔本大学团队针对绿金钟蛙（Litoria aurea）开展hCG（人绒毛膜促性腺激素）重复给药研究。发现多次激素注射会显著降低精子浓度、总量及存活率，且精子释放时间延迟至注射后6小时。该成果为濒危物种 captive breeding programs 提供关键数据，发表于《General and Comparative Endocrinology》。

　　

论文解读
全球两栖动物种群正以惊人速度衰退，40%物种被列为濒危。绿金钟蛙（Litoria aurea）作为澳大利亚受威胁物种，其保护面临严峻挑战。尽管辅助生殖技术（ART）如外源性激素诱导排精（spermiation）被广泛应用，但重复使用人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin, hCG）对精子数量与质量的长期影响尚不明确。这一问题直接关系到濒危物种 captive breeding programs 的可持续性——若重复激素注射导致精子质量下降，将严重影响人工繁殖成功率。

为解决这一关键问题，澳大利亚墨尔本大学团队开展了一项系统性研究。研究人员采用hCG（20 IU/g剂量）对L. aurea雄性个体进行间隔性注射（双周、每周或隔周频率，每组n=6），并在每次注射后2、4、6小时采集精液样本。通过分析精子浓度、总量、体积及存活率等指标，首次揭示了重复激素给药的负面影响。

关键技术方法
实验选用18只成年雄性L. aurea，在标准化饲养条件下（450 L户外围栏，25%陆地/75%水生环境）进行。采用hCG（20 IU/g）肌肉注射，按不同频率（双周/每周/隔周）重复3-5次。每次注射后2/4/6小时采集精液，使用血细胞计数板评估精子浓度，荧光染色（Hoechst 33342/碘化丙啶）检测存活率。数据通过广义线性混合模型（GLMM）分析。

研究结果

1. 精子数量与质量的显著下降：随着注射次数增加，精子浓度、总量及存活率均显著降低（p<0.05）。例如，第4次注射后的精子总量较首次下降达47%。
2. 释放时间延迟效应：首次注射后精子在2-6小时内均匀释放，而多次注射后精子释放高峰延迟至6小时（p<0.01）。
3. 频率无关性：精子下降程度与注射间隔（双周/每周/隔周）无显著关联，表明影响主要来自累积给药次数而非频率。

讨论与意义
该研究首次证实hCG重复给药会通过下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）干扰L. aurea的精子发生周期，导致生精上皮（spermatogenic epithelium）功能暂时性耗竭。这一发现对濒危物种保护具有双重意义：

1. 实践指导：建议人工繁殖中两次激素注射间隔≥2周，并优先采集注射后6小时的精液样本；
2. 理论价值：为两栖动物生殖毒理学研究建立模型，可拓展至环境污染物（如内分泌干扰物）对野生种群影响的评估。

研究团队特别指出，未来需结合组织学验证生精小管（seminiferous tubules）的病理变化，并探索激素受体（如LHCGR）表达调控机制。该成果为IUCN红色名录物种的辅助生殖技术优化提供了关键数据支撑。