多重等位基因特异性PCR快速检测结核分枝杆菌异烟肼和氟喹诺酮耐药性的评估：印度高负担地区的横断面研究

为解决结核病耐药性检测耗时且成本高的问题，研究人员在印度高负担地区开展了一项横断面研究，评估多重等位基因特异性PCR（MAS-PCR）在快速检测异烟肼（INH）和氟喹诺酮（FQ）耐药性中的性能。结果显示，MAS-PCR对INH和FQ耐药性的检测准确率分别达91.06%和94.31%，且具有成本低、技术简便的优势，为资源有限地区提供了可行的替代方案。

　　

结核病（TB）是全球最致命的传染病之一，而印度承担了全球26%的病例负担。耐药结核病的蔓延，尤其是异烟肼（INH）和氟喹诺酮（FQ）耐药性，使得疫情雪上加霜。传统药敏试验（DST）耗时长，而分子检测工具如Xpert MTB/RIF仅能检测利福平（RIF）耐药性，Xpert MTB/XDR虽可覆盖更多药物但成本高昂。线探针检测（LPA）虽能识别一线和二线药物耐药性，但对实验室条件要求高，普及受限。因此，开发一种快速、经济且精准的耐药性检测方法迫在眉睫。

针对这一需求，印度布巴内斯瓦尔全印医学科学研究所微生物学系与克塔克中级参考实验室合作，开展了一项横断面研究，评估多重等位基因特异性PCR（MAS-PCR）在检测INH和FQ耐药性中的表现。研究于2022年3月至2023年4月进行，纳入123例结核分枝杆菌（MTB）临床分离株，通过LPA（Genotype MTBDR^plus和MTBDR^sl）和MAS-PCR同步检测耐药性。MAS-PCR靶向INH耐药相关基因katG³¹⁵和inhA-15启动子区突变，以及FQ耐药关键位点gyrA⁹⁴。

主要技术方法
研究采用横断面设计，以LPA为金标准对比MAS-PCR性能。样本来自Lowenstein Jensen（LJ）和MGIT培养阳性分离株，经ZN染色和MPT64抗原确认。DNA提取使用Genolyse试剂盒，MAS-PCR针对katG³¹⁵、inhA-15和gyrA⁹⁴设计特异性引物，通过电泳判读结果。

结果

1. INH耐药检测：MAS-PCR检出22.76%（28/123）阳性，灵敏度80.77%，特异性93.81%，与LPA一致性达91.06%。
2. FQ耐药检测：MAS-PCR检出15.44%（19/123）阳性，灵敏度87.50%，特异性95.33%，准确性94.31%。
3. 不一致案例：6例INH耐药仅MAS-PCR阳性，5例仅LPA阳性；2例FQ耐药仅MAS-PCR检出，提示MAS-PCR可能捕获部分LPA遗漏突变。

讨论与意义
MAS-PCR以6-7小时的检测时长和低廉成本，展现出与LPA相当的高准确性（>90%）。其技术门槛低，适合基层实验室推广，可弥补印度现有1268台CBNAAT和67个LPA实验室的服务缺口。研究局限性在于仅靶向高频突变（如gyrA⁹⁴占FQ耐药73%），可能遗漏罕见突变。未来可优化引物组合以提升覆盖率。

该研究为资源有限地区提供了INH和FQ耐药性的快速筛查工具，助力实现WHO终止结核病战略中的“早诊断、早治疗”目标。论文发表于《Indian Journal of Tuberculosis》，为全球高负担国家的耐药结核防控提供了重要技术参考。