Src家族激酶抑制剂Dasatinib与糖皮质激素协同抑制舌鳞状细胞癌的机制研究：靶向MET激酶活性与p130Cas磷酸化的新策略

本研究针对舌鳞状细胞癌(TSCC)治疗困境，通过高通量筛选发现FDA批准药物糖皮质激素(GCs)与Src家族激酶(SFK)抑制剂Dasatinib(DAS)具有显著协同抗肿瘤效应。研究人员利用34株TSCC细胞系，结合Western blot、3D软琼脂克隆形成等技术，证实该组合通过抑制MET-Gab1信号通路、下调p130Cas表达并诱导G1期阻滞，为临床转化提供新方案。成果发表于《Cell Communication and Signaling》，为实体瘤联合治疗开辟新途径。

　　

舌鳞状细胞癌(TSCC)作为头颈部最具侵袭性的恶性肿瘤之一，其五年生存率长期徘徊在50%左右。尽管手术联合放化疗是当前标准治疗方案，但晚期患者往往面临全舌切除的致残性治疗，且缺乏有效的分子靶向药物。这种临床困境背后，是学界对TSCC特异性信号通路的认知空白——虽然已知表皮生长因子受体(EGFR)抗体西妥昔单抗(Cetuximab)对部分头颈癌有效，但针对舌癌的特异性靶点仍属未知。更棘手的是，酪氨酸激酶抑制剂单药治疗在实体瘤中普遍存在疗效短暂、易产生耐药等问题，这使得寻找具有协同效应的药物组合成为突破治疗瓶颈的关键。

德国马丁路德大学哈勒维滕贝格分校医学分子研究所的Ali N.A.Hmedat团队在《Cell Communication and Signaling》发表的研究，为这一难题提供了创新解决方案。研究人员通过对34株TSCC细胞系的蛋白质酪氨酸磷酸化(pTyr)图谱分析，意外发现所有细胞系均呈现高度一致的磷酸化模式，其中130kDa的p130Cas蛋白尤为突出。这一现象提示SFK-p130Cas信号轴可能是TSCC的共性治疗靶点。为验证这一假设，团队采用FDA批准的SFK抑制剂达沙替尼(Dasatinib, DAS)展开研究，并通过1600种已上市药物的高通量筛选，意外发现糖皮质激素(Glucocorticoids, GCs)与DAS具有显著协同效应。

研究主要运用了以下关键技术：34株TSCC细胞系(30株源自原发灶，4株来自转移灶)的蛋白质组分析；基于抗磷酸化酪氨酸抗体的Western blot技术；高通量药物筛选系统(Pharmakon 1600库)；3D软琼脂克隆形成实验评估锚定非依赖性生长；流式细胞术检测细胞周期分布；衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色和Acridin Orange(AO)自噬检测等。

相似性酪氨酸磷酸化模式和130 kDa pTyr蛋白的突出表现
Western blot分析揭示34株TSCC细胞系存在高度保守的pTyr谱，其中p130Cas在Tyr410位点的磷酸化(pY410)普遍存在。SFK抑制剂PP2和DAS均可显著降低整体pTyr水平和p130Cas磷酸化，活细胞成像显示PP2还能逆转上皮-间质转化(EMT)表型。

Dasatinib以剂量依赖方式抑制TSCC细胞生长和SFK活性
临床浓度(100nM)的DAS处理可持久抑制Src pY416和p130Cas pY410磷酸化。在2D培养中，DAS对BICR56、CAL27和SAS细胞的IC₅₀分别为~50nM、~200nM和~2000nM；3D软琼脂实验显示DAS能剂量依赖性抑制克隆形成，证实其对肿瘤微环境模拟条件下的生长抑制。

高通量药物组合筛选鉴定与Dasatinib协同作用的药物
筛选发现GCs(如氟替卡松Fluticasone, FL)与DAS具有最强协同效应。25nM FL可使SAS细胞对DAS敏感性提升3倍，台盼蓝排除实验证实组合治疗显著降低活细胞数(p<0.01)。

Dasatinib+地塞米松组合治疗在2D和3D培养中显示强协同效应
地塞米松(Dexamethasone, DX)单用无显著细胞毒性，但100nM DX使DAS在SAS细胞的IC₅₀从2000nM降至34nM(58倍增效)。3D实验中，DX+DAS使CAL27细胞的IC₅₀从500nM降至3.2nM(145倍增效)，这种协同效应在多种GCs(氢化可的松、甲基强的松龙)中均存在。

分子机制解析
Western blot显示DX+DAS组合可下调p130Cas总蛋白水平。更关键的是，DX能快速(4h内)抑制MET受体Y1234/1235磷酸化和其底物Gab1 Y627磷酸化，但体外激酶实验证实DX不直接抑制MET活性，提示其通过上游调控发挥作用。细胞周期分析显示组合治疗使G1期细胞比例从59.7%增至86.2%，伴随CDK1/4/6和Cyclin B1/D3下调。SA-β-gal染色和p27^Kip1表达升高提示衰老诱导，AO荧光增强表明自噬水平提升。

这项研究首次在实体瘤中证实DAS与GCs的强协同作用，其科学价值体现在三方面：首先，发现GCs作为MET信号的新型间接抑制剂，为克服现有MET靶向药的毒性问题提供新思路；其次，阐明p130Cas-SFK-MET轴是TSCC的共性脆弱点，为精准医疗提供分子标志；最后，提出重新利用廉价易得的GCs进行联合治疗的转化路径。特别值得注意的是，研究中使用的GCs浓度(如100nM DX)完全在临床可及范围内，这种"老药新用"策略可大幅缩短研发周期。未来研究需在动物模型中验证该组合的体内效果，并探索GCs调控MET通路的精确分子机制。