B细胞失调诱导抗CD4单抗通过ADCC效应调控HIV感染免疫无应答者的免疫重建机制研究

针对HIV感染者中免疫无应答者(INR)CD4+T细胞重建障碍的难题，中南大学湘雅医院团队揭示了B细胞异常活化通过BAFFR通路促进抗CD4单抗(anti-CD4 mAb)产生，进而增强NK细胞介导的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的分子机制。研究发现抑制BAFFR可减少抗CD4 mAb分泌，为INR的免疫治疗提供了新靶点。

　　

在艾滋病治疗领域，尽管抗逆转录病毒疗法(ART)能有效抑制HIV病毒复制，但约15-20%的感染者会发展为免疫无应答者(INR)——他们的CD4⁺T细胞计数始终低于350个/μL，死亡率显著高于免疫应答者。这个临床难题背后隐藏着什么机制？中南大学湘雅医院感染病科团队在《Molecular Medicine》发表的研究，揭开了B细胞失调通过抗CD4单抗调控免疫重建的神秘面纱。

研究团队发现INR患者存在独特的B细胞异常活化现象，其血清中抗CD4 IgG水平显著升高。通过噬菌体随机肽库筛选，团队首次鉴定出能与抗CD4 mAb特异性结合的AAPMFSHSVQLP-CD4多肽。在机制层面，证实BAFFR（B细胞活化因子受体）过表达驱动B细胞产生抗CD4 mAb，后者通过结合CD4⁺T细胞表面抗原，招募NK细胞释放穿孔素(Perforin)、颗粒酶B(Granzymes B)和TNF-α/TNFR-I，形成致命的ADCC效应。

关键技术包括：从16例HIV感染者（含8例INR）分离PBMC进行B细胞功能分析；构建人源化小鼠模型验证抗CD4 mAb作用；采用流式细胞术检测BAFFR表达；通过GST-pull down鉴定多肽-抗体相互作用；使用shRNA敲低BAFFR基因。

主要结果
重组和扩增抗CD4 mAb
从INR患者B细胞中成功克隆出抗CD4 mAb的重链（IGHV1-69 * 01 F株系）和轻链（IGKV3D-11 * 02 F株系），Western blot证实其为功能性重组蛋白。

抗CD4 mAb体外介导NK细胞毒性
发现抗CD4 mAb可使NK细胞毒性提升2.3倍（P<0.01），显著增加CD107a⁺IFN-γ⁺ NK细胞比例（P<0.001），该效应依赖穿孔素/颗粒酶B通路而非FasL途径。

ADCC效应对CD4⁺T细胞的影响
抗CD4 mAb可使CD4⁺T细胞凋亡率增加58%（P<0.001），而Fc阻断抗体能逆转此效应，证实ADCC是主要作用机制。

抗CD4 mAb与CD4多肽相互作用
通过噬菌体展示技术筛选出8个候选多肽，其中AAPMFSHSVQLP-CD4与抗CD4 mAb亲和力最强（K_d=1.2 nM），GST-pull down验证其特异性结合。

人源化小鼠模型验证
联合使用抗CD4 mAb和GST-CD4多肽可使小鼠CD4⁺T细胞数量恢复至对照组85%（P<0.01），脾脏HIV p24抗原水平下降72%。

INR患者B细胞功能异常
流式检测显示INR患者BAFFR⁺ B细胞比例较健康对照高3.1倍（P<0.001），抗CD4 mAb血清浓度达128.7 ng/mL（健康组仅21.3 ng/mL）。

BAFFR敲低的作用
shRNA敲低BAFFR使B细胞活性降低50%（P<0.01），抗CD4 mAb分泌减少67%，证实BAFFR是调控关键节点。

这项研究首次阐明B细胞-BAFFR-抗CD4 mAb-ADCC轴是INR免疫重建失败的核心机制。临床转化方面，靶向BAFFR的小分子抑制剂或CD4阻断多肽有望成为INR的精准治疗策略。理论层面，为理解抗体介导的免疫耗竭提供了新范式，对SLE、RA等自身免疫病研究也有启示意义。团队指出，未来需在非人灵长类模型验证BAFFR抑制的安全性，并探索多肽药物与ART的联合治疗方案。