高灵敏度β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因检测技术在小鼠血细胞多重免疫分析中的应用与优化

为解决内源性β-半乳糖苷酶高表达及传统检测底物灵敏度不足的问题，研究人员开发了基于SPiDER-βGal荧光探针的多色流式细胞术方案，结合溶酶体质子泵抑制剂Bafilomycin A1和60分钟孵育优化，将LacZ报告基因检测灵敏度提升10倍，显著增强了对活体白细胞基因表达研究的适用性。

　　

细菌β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, LacZ)作为经典报告基因，虽广泛应用于小鼠模型的基因表达研究和条件性基因敲除，但其检测面临内源性酶高表达(尤其在髓系细胞)和传统底物灵敏度低的双重挑战。研究团队创新性采用可细胞内固定的荧光探针SPiDER-βGal，通过多色流式细胞术(multicolor FACS)实现了小鼠主要血细胞群体中LacZ的高灵敏度检测。

有趣的是，虽然SPiDER-βGal能突破传统检测极限，但髓系细胞溶酶体内丰富的内源性β-半乳糖苷酶仍会产生背景干扰。实验发现，质子泵抑制剂Bafilomycin A₁通过升高溶酶体pH值，可特异性抑制内源性酶活性，使转基因LacZ信号"浮出水面"。将探针孵育时间延长至60分钟后，检测灵敏度更是产生惊人的10倍提升。

这项技术突破不仅实现了^{ex vivo}条件下高背景细胞中LacZ的精准分析，更开创性地将多色流式分选技术应用于活态LacZ阳性白细胞，为后续基因功能和免疫学研究提供了"细胞级"研究工具。溶酶体pH调控策略的引入，或许能为其他酶类报告系统的优化提供新思路。