入侵性爬行动物痕量DNA回收与检测的实践考量：基于不同沉积场景的玉米蛇(Pantherophis guttatus)模型研究

这篇研究创新性地开发了环介导等温扩增(LAMP)技术用于检测入侵物种玉米蛇(Pantherophis guttatus)的痕量DNA。通过系统评估蜕皮样本存储条件(UV-C照射/环境光/黑暗/-80°C)、不同接触表面(报纸/塑料/陶器/玻璃)的DNA存留时间(0-168小时)以及户外环境(草地/岩石/土壤)对DNA降解的影响，证实LAMP结合快速提取法(QuickExtract)可实现长达10周的稳定检测。研究为生物安全监测(eDNA)和野生动物法医提供了高效工具，特别适用于爬行动物非法贸易的快速合规审查。

　　

样本存储对DNA降解的影响
研究采用玉米蛇蜕皮样本，通过四种存储条件对比：每周30分钟UV-C照射模拟高降解、环境光室温、黑暗室温及-80°C冷冻。使用Qiagen Blood&Tissue试剂盒提取1 cm²皮肤样本，便携式Franklin仪器单鳞片快速提取(QuickExtract)。结果显示所有处理组DNA浓度10周内保持稳定，但UV-C组检测时间(TTP)显著延长。值得注意的是，单鳞片提取仍可实现8分钟快速检测，证实该方法适用于现场快速筛查。

接触表面痕量DNA回收
设计25个模拟饲养箱实验，在移除活体蛇后0/24/48/96/168小时分别采样报纸、塑料藏身处、釉面陶碗和玻璃基底。预湿FLOQSwabs结合0.1% Triton-X100溶液采样，QuickExtract提取。数据显示所有表面168小时内均能检测，但玻璃基底阳性率最低(44% vs 塑料78%)。模型分析表明不同时间点检测概率无显著差异，支持该方法在合规检查中的可靠性。

环境条件下的蜕皮DNA降解
将50 mg蜕皮样本置于草地/岩石/土壤及实验室对照，8周内每两周采样。尽管环境样本TTP随暴露时间延长(土壤组每周增加1.548分钟)，但所有条件均维持检测能力。实验室对照组保持最佳性能(6.3分钟TTP)，而草地组降解最快(12.81分钟)，可能与紫外线暴露和微生物活动相关。研究同时记录气候参数，发现降雨事件与DNA降解速率存在潜在关联。

LAMP技术优势与应用前景
相比传统PCR，LAMP技术具有抗抑制剂(如土壤腐殖酸)、无需热循环(65°C恒温)等优势。研究开发的ND4基因208 bp检测体系，结合便携式设备，为边境检疫和公民科学项目提供可能。例如建议利用"爬行动物基因库"收集公众提交的蜕皮样本，这对澳大利亚等重点防控区域尤为重要。

创新价值与局限
该研究首次系统量化了爬行动物痕量DNA在不同场景下的存留时间，填补了eDNA在陆生蛇类监测的空白。但环境样本的pH值、导电性等参数未纳入分析，未来可结合宏基因组学进一步优化。总体而言，这项技术为遏制玉米蛇等入侵物种扩散提供了突破性的生物安全工具。