重编程淋巴管内皮细胞葡萄糖代谢：靶向miR-484-HK2轴治疗淋巴管生成相关疾病的新策略

本研究针对病理性淋巴管生成（Lymphangiogenesis）在角膜移植排斥、肿瘤转移等疾病中的关键作用，创新性发现miR-484通过靶向糖酵解关键酶HK2（Hexokinase 2）调控淋巴管内皮细胞（LECs）代谢重编程，并开发外泌体递送系统显著增强其抗淋巴管生成效果，为治疗相关疾病提供新型核酸药物策略。

　　

研究背景与意义
淋巴管生成（Lymphangiogenesis）是炎症、肿瘤转移和移植排斥等疾病的关键推手，但现有抗VEGF疗法存在耐药性和副作用等问题。淋巴管内皮细胞（LECs）依赖糖酵解供能的特点为干预提供了新思路，然而调控这一过程的分子机制尚不明确。南京医科大学团队在《Pharmacological Research》发表的研究，首次揭示miRNA通过代谢重编程抑制淋巴管生成的分子机制，并创新性地利用外泌体递送技术突破核酸药物应用瓶颈。

关键技术方法
研究通过角膜缝线小鼠模型和LPS刺激的LECs模拟病理性淋巴管生成，结合生物信息学预测和双荧光素酶报告验证miR-484与HK2的靶向关系。采用Seahorse XFe96分析细胞外酸化率（ECAR），JC-1探针检测线粒体膜电位，并利用人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）来源外泌体装载miR-484。临床样本来自角膜移植患者的捐赠与受体组织。

研究结果
3.1 miR-484表达在病理性淋巴管生成中降低
通过荧光原位杂交（FISH）和qRT-PCR证实，炎症刺激下LECs和小鼠角膜模型中miR-484表达显著下调，提示其负调控作用。

3.2 miR-484抑制LECs功能
EdU和Transwell实验显示，过表达miR-484可抑制LECs增殖、迁移及管形成能力，而抑制miR-484则促进这些表型。

3.3 体内验证miR-484的抗淋巴管生成作用
角膜缝线模型和Matrigel栓实验中，miR-484激动剂（agomir）显著减少LYVE-1⁺淋巴管面积，且降低IL-6等炎症因子表达。

3.4 miR-484直接靶向HK2
数据库交叉预测和实验验证显示，miR-484通过结合HK2的3'-UTR抑制其表达，Western blot证实HK2蛋白水平受miR-484调控。

3.5-3.7 代谢调控机制解析
Seahorse检测发现miR-484降低糖酵解代谢产物（乳酸、ATP），JC-1显示线粒体膜电位受损。HK2过表达可逆转miR-484对LECs功能和淋巴管生成的抑制作用。

3.8-3.10 外泌体递送系统的突破
hUC-MSCs来源外泌体成功装载miR-484（Exos-miR-484），电穿孔技术使装载效率提升3倍。体内实验证实其显著增强药物角膜滞留性，且无肝肾毒性。

结论与意义
该研究首次阐明miR-484-HK2轴通过"代谢检查点"调控淋巴管生成的新机制：miR-484下调HK2表达→抑制糖酵解/线粒体功能→阻断LECs能量供应→抑制病理性淋巴管生成。外泌体递送技术的应用克服了miRNA易降解的难题，为角膜移植排斥、肿瘤淋巴转移等疾病提供了兼具靶向性和安全性的治疗策略。未来需进一步优化外泌体靶向递送效率，推动临床转化。