基于高通量筛选的TRIP13抑制剂开发新策略及其在癌症治疗中的潜在应用

研究人员针对癌症治疗中TRIP13靶点抑制剂开发缺乏高效筛选方法的难题，通过建立ADP-Glo发光检测系统的高通量筛选(HTS)平台，成功筛选出IC50为5 μM的强效抑制剂anlotinib，并通过CETSA验证其直接结合作用，为Rb缺陷型癌症的靶向治疗提供新工具。

　　

癌症治疗领域长期面临靶向药物开发效率低下的挑战，尤其是针对甲状腺激素受体相互作用蛋白13（TRIP13）这类关键调控因子的抑制剂研发。TRIP13作为AAA+ ATP酶家族成员，通过调控有丝分裂检查点蛋白Mad2的构象转换，在多种癌症中过度表达并与不良预后相关。然而，由于缺乏可靠的高通量筛选方法，TRIP13抑制剂的开发长期停滞不前。美国德克萨斯大学奥斯汀分校的研究团队在《SLAS Discovery》发表的研究，通过创新性技术手段破解了这一瓶颈。

研究团队采用ADP-Glo发光检测系统建立TRIP13 ATP酶活性检测体系，优化反应条件后开发出z'-factor>0.85、信噪比(S/B)达6的高通量筛选平台。通过4000种化合物的筛选和验证，最终发现抗癌药物anlotinib能直接结合TRIP13并抑制其活性（IC₅₀=5 μM），细胞热转移实验(CETSA)证实了该相互作用在细胞内的特异性。

【关键技术方法】
研究采用384孔板微型化反应体系，通过ADP-Glo系统检测ATP水解产物ADP的转化率；优化TRIP13浓度（100 nM）、ATP底物浓度（5 μM）及室温3小时反应条件；使用HeLa细胞进行CETSA验证；通过剂量反应曲线计算抑制剂的半数抑制浓度(IC₅₀)。

【研究结果】
3.1 发光检测体系优化
建立TRIP13浓度与ATP水解活性的线性关系，发现全长蛋白比截短体活性高2倍。优化后的5 μM ATP浓度可实现10%转化率，且耐受5% DMSO和0.5% Tween 20。

3.2 高通量筛选验证
对4000种化合物筛选获得50个初筛命中化合物（抑制率>25%），其中28个为多酚类。验证实验排除假阳性后，6个化合物显示特异性抑制，包括已知激酶抑制剂anlotinib。

3.3 命中化合物验证
剂量实验显示anlotinib的IC₅₀为5.5±1.0 μM，CETSA证明其能提高TRIP13热稳定性（20 μM处理组在64-74°C保持可检测蛋白量）。

【结论与意义】
该研究首次建立TRIP13的高通量筛选平台，发现anlotinib作为TRIP13抑制剂的潜在应用价值。虽然anlotinib是多靶点药物，但其与TRIP13的特异性结合为药物重定位提供新思路。研究者指出TRIP13独特的AAA+ ATP酶结构域可能有助于开发特异性抑制剂，未来需扩大筛选范围并测试对其他AAA+ ATP酶的选择性。这项技术突破为Rb缺陷型癌症等难治性肿瘤的联合治疗策略开发奠定基础。