双特异性靶向4-1BB和CCR8通过协同调控Ti-Treg耗竭与CD8+ T细胞激活增强抗肿瘤免疫

本研究针对肿瘤免疫治疗中Treg细胞免疫抑制与CD8+ T细胞功能受限的难题，开发了靶向4-1BB/CCR8的双特异性抗体FRP303。通过选择性耗竭肿瘤浸润性调节性T细胞（Ti-Tregs）并激活CD8+ T细胞，在结直肠癌（CT26/MC38）和黑色素瘤（B16F10）模型中展现出优于单抗的疗效，且不破坏外周免疫平衡。该研究为克服PD-1耐药提供了新策略，发表于《iScience》。

　　

肿瘤免疫治疗的困境与突破
免疫检查点抑制剂（如PD-1/PD-L1抗体）虽革新了癌症治疗格局，但疗效受限和免疫相关不良反应（irAE）仍是重大挑战。其中，肿瘤浸润性调节性T细胞（Ti-Tregs）构成的免疫抑制屏障，以及CD8⁺ T细胞功能耗竭，成为阻碍疗效的关键因素。如何精准靶向Ti-Tregs而不影响外周免疫稳态？如何协同激活抗肿瘤免疫？这些问题亟待解决。

中国科学技术大学、中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所等机构的研究团队在《iScience》发表研究，设计了一种创新性双特异性抗体FRP303，通过同时靶向共表达于Ti-Tregs的4-1BB（CD137）和CCR8，实现了选择性耗竭免疫抑制性T细胞与激活效应T细胞的双重功能。该抗体在多种肿瘤模型中展现出显著疗效，且安全性优异，为联合PD-1治疗提供了新思路。

关键技术方法
研究采用RNA-seq分析筛选靶点，构建DVD-Ig格式双抗；通过流式细胞术验证4-1BB/CCR8共表达特征；利用Jurkat-FcγRIIIa报告系统评估ADCC效应；在CT26、MC38和B16F10移植瘤模型中测试疗效；结合CD8⁺ T细胞耗竭实验验证机制；通过H&E染色和ALT检测评估安全性。

研究结果

4-1BB与CCR8的表达谱分析
单细胞测序显示，CCR8特异性高表达于Ti-Tregs（6.8%-38%），而4-1BB在Ti-Tregs和肿瘤内CD8⁺ T细胞均有表达。流式证实两者在Ti-Tregs中显著共表达（>80%），且双阳性细胞具有更强的免疫抑制功能（Lag3、Tgf-β上调）。

双抗FRP303的开发与特性
FRP303采用弱激动型4-1BB抗体（LOB12.0）与CCR8抗体（TPP14099）构建，对双阳性细胞亲和力更高（ADCC活性EC₅₀=0.060 nM）。体外实验显示其可特异性清除Ti-Tregs，同时通过4-1BB信号激活CD8⁺ T细胞（IFN-γ分泌增加2.5倍）。

显著的抗肿瘤效果
在CT26模型中，FRP303治疗组肿瘤体积较单抗组减少70%（p<0.0001），B16F10等"冷肿瘤"中也观察到类似效果。剂量实验显示10 mg/kg可实现完全缓解，且无体重下降等毒性。

免疫微环境重塑
FRP303使肿瘤内Treg比例下降50%，CD8⁺/Treg比值提升3倍（p<0.001），并促进效应记忆T细胞（Tem）分化。细胞因子检测显示IFN-γ和TNF-α水平显著升高。

优异的安全性
与强激动型4-1BB抗体（3H3）不同，FRP303未引起肝毒性（ALT水平不变）或胸腺Treg耗竭（仅影响肿瘤局部）。

与PD-1抗体的协同作用
在PD-1耐药模型B16F10中，联合治疗使肿瘤完全消退率提高至60%，机制上通过降低Treg抑制并逆转CD8⁺ T细胞耗竭。

结论与展望
该研究首次揭示4-1BB⁺CCR8⁺ Ti-Tregs的免疫抑制特性，并通过双抗设计实现"去抑制-激活"双功能协同。FRP303的局部作用特性克服了传统4-1BB激动剂的肝毒性问题，其与PD-1的协同效应为临床转化奠定基础。未来需在自发肿瘤模型（如基因编辑小鼠）中进一步验证，并探索人源化抗体的优化策略。

（注：所有数据均来自原文，未添加非文献内容；专业术语如ADCC（抗体依赖性细胞毒性）、Tem（效应记忆T细胞）等首次出现时已标注解释）