iPSC来源的三模态CAR-TCR-hnCD16 T细胞：攻克异质性肿瘤抗原逃逸的新策略

本研究开创性地将CAR（嵌合抗原受体）、TCR（T细胞受体）和hnCD16（高亲和力不可切割CD16变体）整合到iPSC（诱导多能干细胞）衍生的T细胞中，构建出"三模态"T细胞疗法。该疗法通过多靶点协同作用（CAR靶向表面抗原、TCR识别细胞内抗原、hnCD16介导ADCC），在体外和体内实验中均显著抑制异质性肿瘤生长，为解决肿瘤抗原逃逸难题提供了突破性方案。

　　

iPSC来源的三模态T细胞工程化突破

肿瘤异质性和抗原逃逸是CAR-T细胞治疗面临的主要挑战。传统策略如多CAR共表达或CAR-T细胞组合疗法存在技术局限。本研究通过诱导多能干细胞（iPSC）平台，成功开发出同时表达CAR、TCR和hnCD16的"三模态"T细胞（iT细胞），为肿瘤免疫治疗带来新突破。

三模态iT细胞的成功构建

研究团队采用CRISPR技术在TRAC基因位点插入包含BCMA CAR和hnCD16的DNA片段，再通过慢病毒转导NYESO1特异性TCR（1G4 TCR），构建出三模态TiPSC细胞系。分化后的iT细胞显示：TRAC驱动的CAR与CD3ε共表达（>98%），证明成功定向T细胞谱系；流式细胞术证实CAR、TCR和hnCD16的均匀共表达；基因表达谱分析显示iT细胞与CD8⁺ T细胞高度相似。值得注意的是，hnCD16通过CD3ζ传递信号，在iT细胞中激活ZAP-70、LAT、SLP-76和ERK等下游通路，这在T细胞中尚属首次报道。

多模态协同作用的机制验证

在功能验证中，三模态iT细胞展现出令人振奋的特性：

• 独立激活实验显示，BCMA CAR、NYESO1 TCR或hnCD16均能诱导IFNγ和TNFα分泌增加，CD107a/b表达上调
• 长期连续杀伤实验中，三模态共激活组（CAR+TCR+ADCC）的肿瘤控制效果最佳，CD25上调程度显著高于单模态组
• 在A549肿瘤模型中，MICA/B CAR单独作用时细胞毒性不完全，加入MR1 TCR后显著增强（p<0.0001），再联合抗EGFR抗体诱导ADCC后效果进一步提升
• 细胞因子分析显示，三模态共激活时TNFα产量达到峰值（p<0.0001），证实协同效应

克服肿瘤异质性的动物实验证据

研究设计了三种Nalm6白血病模型验证三模态iT细胞的治疗效果：

1. BCMA⁺与NYESO1⁺肿瘤1:1混合模型中，CAR+TCR组较CAR单用组显著延长生存期（p<0.0028）
2. MICA⁺:CD38⁺:NYESO1⁺（1:3:16）混合模型中，CAR+TCR+ADCC组在第25天骨髓检测显示CD38⁺肿瘤完全清除（p=0.0468）
3. 优化模型中，三模态组小鼠生存期延长至42天，而CAR+ADCC组仅28天。终点分析显示，三模态组有效控制所有肿瘤亚群，而CAR+ADCC组出现NYESO1⁺肿瘤逃逸

技术优势与临床转化前景

该研究的突破性体现在：

1. iPSC平台确保工程化细胞的均一性，克服传统T细胞编辑的异质性问题
2. hnCD16赋予"抗原靶向灵活性"，可通过更换抗体适应不同肿瘤抗原
3. 三模态协同作用实现"立体打击"：CAR靶向表面抗原（如BCMA）、TCR识别细胞内抗原（如NYESO1）、hnCD16通过ADCC覆盖其他靶点（如CD38）

局限性包括：目前模型依赖过表达抗原；实体瘤模型需进一步验证；iT细胞体内持久性有待提高。研究者建议通过多次给药或持久性增强工程来解决这些问题。

这项研究为开发"通用型"细胞疗法奠定基础，三模态iT细胞有望成为对抗难治性、异质性肿瘤的有力武器，特别是对存在抗原丢失风险的恶性肿瘤提供新的治疗选择。