转录介导扩增技术检测梅毒螺旋体RNA的高灵敏度与特异性研究

这篇研究深入评估了研究专用(RUO)转录介导扩增(TMA)技术检测梅毒螺旋体(T. pallidum) RNA的性能。通过3586例直肠拭子样本验证，证实该技术对T. pallidum的检测灵敏度达9-48细胞/mL，且不受其他密螺旋体属(如T. denticola)或干扰物质(润滑剂、精液等)影响，为男男性行为者(MSM)群体提供了新型辅助诊断工具。

　　

ABSTRACT
研究专用(RUO)实时转录介导扩增(TMA)技术对梅毒螺旋体(T. pallidum)的检测显示，在性传播感染高风险男男性行为者(MSM)群体中，其核酸检出结果与非密螺旋体血清学结果高度吻合。特异性评估显示，3586例"未检出"直肠拭子的平均终点FAM荧光值为637.5单位，而添加T. denticola等非目标密螺旋体核酸后荧光值仅620.7-633.5单位(P≥0.15)。润滑剂、滑石粉等干扰物质亦未引起荧光升高(P≥0.20)。

INTRODUCTION
MSM群体原发性/继发性梅毒发病率是异性恋男性的100倍。虽然血清学仍是诊断金标准，但核酸扩增检测(NAAT)可提供辅助诊断价值。前期研究表明，基于23S rRNA的TMA技术对自采直肠拭子检测结果与血清学转化存在相关性，但需验证其是否受直肠复杂微生物群(包括共生密螺旋体)或干扰物质影响。

MATERIALS AND METHODS
采用Hologic公司Panther系统进行实时TMA检测，阈值设定为40分钟内FAM荧光>1000单位。使用Aptima采样套装收集直肠拭子，建立模拟基质进行干扰实验。通过Qubit RNA HS/BR试剂盒定量非T. pallidum密螺旋体RNA，用兔睾丸培养的Nichols株T. pallidum进行灵敏度测试。

RESULTS
特异性验证显示，添加T. denticola等非目标密螺旋体(最高浓度2788.7 ng/mL)未产生假阳性，荧光值与空白对照无统计学差异(P≥0.22)。值得注意的是，T. endemicum(地方性密螺旋体)引发显著荧光响应(3949.9单位，P<0.0002)，这与该菌株与T. pallidum基因相似度>99.7%的特性相符。

干扰实验中，添加滑石粉(654.4单位)、精液(624.0单位)等物质后，荧光值与基质对照(633.0单位)无显著差异(P≥0.20)。当这些物质与10⁴/mL T. pallidum混合时，荧光动力学曲线与纯菌悬液相似(P≥0.14)，证实无抑制效应。

灵敏度测试显示，在直肠拭子基质中，95%检测限为9细胞/mL(标本运输介质中为48细胞/mL)；对23S rRNA转录本的检测限在直肠基质中低至421拷贝/mL，显著优于运输介质的5707拷贝/mL。

DISCUSSION
该技术的高灵敏度(可检测<10细胞/mL)特别适合早期感染诊断，因T. pallidum可在2小时内从黏膜侵入深层组织。与PCR等传统NAAT相比，TMA技术对CT/NG等病原体的优越性已有文献支持。研究同时排除了直肠常见物质(如精液pH8.2)对荧光信号的干扰，但需注意不同品牌润滑剂的成分差异可能影响结果。

ACKNOWLEDGMENTS
感谢华盛顿大学提供的T. pallidum Nichols株及T. endemicum菌株。作者声明获得Hologic公司的差旅支持，但结论不代表CDC立场。该技术为MSM群体和女性生殖道样本的梅毒诊断提供了新的研究工具。