巴西樱桃叶提取物抗耐药念珠菌的多靶点机制：体外与计算机模拟研究

针对耐药念珠菌感染的临床挑战，研究人员通过体外实验和计算机模拟，系统评估了巴西樱桃（Eugenia uniflora）叶提取物（SDEEu）对C. albicans、C. auris和C. glabrata的抑制作用。结果显示SDEEu对耐药菌株（MIC低至31.25 μg/mL）具有显著杀菌效果，并能与两性霉素B（AMB）协同增效（FICI=0.022），其机制涉及膜完整性破坏、生物膜抑制及多靶点酶结合（如杨梅苷与角鲨烯单加氧酶结合能-7.8 kcal/mol），为开发植物源抗真菌药物提供了新思路。

　　

随着全球抗微生物药物耐药性（AMR）危机加剧，念珠菌属耐药菌株如耳念珠菌（Candida auris）和光滑念珠菌（C. glabrata）已成为临床重大威胁。传统抗真菌药物如两性霉素B（Amphotericin B, AMB）因耐药性增强而疗效受限，而植物源多靶点抑制剂可能提供突破方向。巴西东北部半干旱地区传统药用植物巴西樱桃（Eugenia uniflora）的叶片长期被用于治疗感染性疾病，但其抗真菌机制尚未系统阐明。

为验证其传统用途并探索新型抗真菌策略，来自巴西科研团队的研究人员采用喷雾干燥技术制备叶片提取物（SDEEu），通过多学科方法评估其对三种临床相关念珠菌（C. albicans、C. auris、C. glabrata）的抑制作用。研究结合体外药效学实验与计算机模拟技术，发现SDEEu对耐药菌株表现出显著活性，尤其与AMB联用时可逆转耐药性。该成果发表于《Journal of Ethnopharmacology》，为开发基于天然产物的抗真菌疗法提供了重要依据。

关键技术方法包括：测定最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MFC）；流式细胞术检测膜完整性；扫描电镜观察形态学改变；棋盘法评估与AMB和制霉菌素（Nystatin, NYS）的协同效应；分子对接模拟分析杨梅苷（myricitrin）等成分与真菌酶（如角鲨烯单加氧酶、1,3-β-葡聚糖合成酶）的结合特性。

结果部分
最小抑制浓度与杀菌活性
SDEEu对C. glabrata和C. auris的MIC均为31.25 μg/mL，MFC为62.50 μg/mL，显著优于对C. albicans的效果（MIC 500 μg/mL）。生长动力学显示其抑制作用持续48小时，尤其在代谢适应期效果显著。

细胞死亡机制
流式细胞术证实SDEEu主要诱导坏死性死亡，而C. glabrata同时出现凋亡特征。电镜观察到膜破裂、芽殖丧失等结构损伤，表明其通过物理破坏膜结构发挥作用。

协同效应与耐药逆转
棋盘实验显示SDEEu与AMB/NYS具有强协同作用，对耐药性最强的C. auris联合指数（FICI）低至0.022。此外，提取物可使生物膜形成降低50%（C. albicans）。

计算机模拟机制
分子对接揭示杨梅苷与角鲨烯单加氧酶（结合能-7.8 kcal/mol）和1,3-β-葡聚糖合成酶（-9.0 kcal/mol）高亲和力结合，提示其通过干扰麦角固醇合成和细胞壁构建发挥多靶点效应。

结论与意义
该研究首次系统阐明SDEEu通过三重机制对抗耐药念珠菌：直接破坏膜完整性、抑制生物膜形成、协同增强现有药物活性。特别值得注意的是，其对"超级真菌"C. auris的耐药逆转作用为临床治疗提供了新思路。计算机模拟结果进一步验证了传统医学的应用基础，表明杨梅苷等酚类物质可通过同时靶向真菌膜和细胞壁合成关键酶，降低耐药风险。

这项研究不仅证实了巴西樱桃在传统医学中的科学价值，更提出了"植物源多靶点抗真菌剂"的开发策略。喷雾干燥技术的应用则解决了植物提取物标准化难题，为产业化奠定基础。未来研究可进一步优化提取工艺，并探索SDEEu在体内感染模型中的疗效，推动其向临床转化。