肠道病原体多重免疫检测技术的开发及其在血液与唾液抗体反应监测中的整合应用

为突破传统肠道病原体检测方法的局限性，研究人员开发了一种基于微球的多重免疫检测技术（MIA），可同步检测血液和唾液中针对细菌（如Shigella、ETEC）、病毒（如norovirus、rotavirus）及原虫（如Cryptosporidium）的IgG/IgA抗体反应。该技术灵敏度高（血清IgG变异系数仅6.7%）、与ELISA强相关（r=0.72–0.96），为资源匮乏地区的流行病学研究提供了非侵入性解决方案，并有望整合疫苗可预防疾病（VPDs）的血清学监测体系。

　　

腹泻性疾病是全球儿童死亡的主因之一，尤其在低收入国家，传统病原体检测面临采样频率高、窗口期短等挑战。血清学检测虽能弥补这些缺陷，但现有技术多局限于单一靶标或样本类型。为此，国外研究团队开发了一种创新的50-plex微球免疫检测技术（MIA），覆盖细菌（如Shigella、ETEC）、病毒（如norovirus、rotavirus）和原虫（如Cryptosporidium）等关键病原体，并首次系统优化了脂多糖（LPS）抗原的偶联方法。该研究发表于《Journal of Immunological Methods》，为整合呼吸道病毒和疫苗可预防疾病（VPDs）的血清监测提供了模块化平台。

关键技术包括：1）Luminex xMAP微球系统构建50-plex MIA；2）采用4-氨基苯甲酰肼氧化法优化LPS偶联；3）使用MAL-ED队列样本验证血清与唾液检测性能；4）通过内部对照和ELISA比对评估交叉反应性。

研究结果
Multiplex immunoassay composition
MIA包含50个靶标，涵盖细菌（如Shigella LPS）、病毒（如norovirus VP1蛋白）和原虫抗原，其中Cryptosporidium parvum蛋白为定制合成。

LPS modification method selection
比较4种LPS修饰方法，发现4-氨基苯甲酰肼氧化法对S. flexneri 2a/3a信号提升最显著（MFI提高3倍），而DMTMM法更适合S. flexneri 6。

Discussion
该MIA首次实现唾液样本中4个数量级的抗体定量（唾液IgG变异系数10.6%），且与ELISA高度一致（r=0.96）。研究团队特别指出，模块化设计允许直接嵌入现有VPD监测体系，如麻疹、破伤风靶标。

结论与意义
这项技术突破了三重瓶颈：1）通过LPS偶联优化提升了细菌抗原检出率；2）唾液检测使儿童等脆弱群体采样更可行；3）50-plex设计显著降低单样本成本。作者强调，该平台可动态监测环境性肠功能障碍（EED）地区的病原体暴露史，为疫苗研发提供精准血清学数据。研究获美国疾控中心（CDC）等机构资助，技术路线已应用于Shigella sonnei疫苗临床试验。