Homo Sapiens (Hsa)-miR-139-5p作为分化型甲状腺癌临床可行预后标志物的表达研究

针对分化型甲状腺癌(DTC)预后评估的不确定性导致过度治疗或管理不足的问题，研究人员通过标准化qPCR和原位杂交技术，验证了miR-139-5p作为预后标志物的价值，建立了区分预后组的表达阈值（miR-139-5pHIGH/LOW），并发现其与TERT启动子突变和Ki-67增殖指数的负相关性，为临床个体化治疗提供新工具。

　　

背景与问题
甲状腺癌是全球最常见的内分泌肿瘤，其中分化型甲状腺癌(DTC)占90%以上。尽管多数DTC预后良好，约15%患者会出现复发、转移或放射性碘(RAI)治疗抵抗，生存率骤降至10%-30%。当前美国甲状腺协会(ATA)风险分层系统虽能有效分类，但仍存在个体风险评估的不确定性，导致低风险患者过度治疗或高风险患者管理不足。分子标志物如TERT启动子突变(TERTprom)虽能补充预后评估，但亟需更敏感且临床可行的生物标志物。

研究设计与意义
来自西班牙国家癌症研究中心(CNIO)等机构的研究团队聚焦微小RNA miR-139-5p——既往研究提示其与甲状腺癌进展相关，但缺乏标准化检测方法和明确预后阈值。本研究通过多中心回顾性队列（60例DTC患者，132份样本），结合qPCR、原位杂交(ISH)和数字病理分析，首次建立miR-139-5p表达阈值，并探索其临床转化潜力。相关成果发表于《Laboratory Investigation》。

关键技术方法
研究采用福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本，通过新一代测序(NGS)检测BRAF/RAS/TERTprom突变；使用标准化qPCR分析miR-139-5p表达（以4个内参miRNA几何均值归一化）；开发自动化的BaseScope ISH技术检测前体miR-139，结合QuPath软件进行数字图像分析；通过逻辑回归和受试者工作特征(ROC)曲线确定预后阈值。验证队列包括癌症基因组图谱(TCGA)和Mancikova等独立数据集。

研究结果

1. miR-139-5p在甲状腺癌中显著下调
qPCR分析显示，98.1%的DTC中miR-139-5p表达较癌旁正常组织(NT)显著降低（P<0.0001），且转移灶较原发灶进一步下降（P=0.027）。TCGA队列验证了这一趋势（59对样本，P<0.0001）。组织学进展案例（如滤泡癌→低分化癌）呈现miR-139-5p表达梯度下降，提示其与肿瘤恶性演进相关。

2. 表达水平与临床病理特征关联
miR-139-5p低表达与TERTprom突变（P=0.001）、诊断时晚期转移（N1b/M1，P=0.031）显著相关，但与驱动基因(BRAF/RAS)或组织学亚型无关。在预后分析中，疾病进展/持续(DP/PD)组miR-139-5p表达（中位数29.4%）显著低于疗效优异(ER)组（45.1%，P=0.004）。

3. 预后阈值建立与验证
ROC分析确定miR-139-5p^HIGH（肿瘤/NT>60%）和miR-139-5p^LOW（<17%）阈值，分别特异性预测ER（96.3%）和DP/PD（96%）。联合TERTprom状态可将模型准确率提升至75%。独立验证队列中，miR-139-5p^LOW对DP/PD的阴性预测值达97%，且成功识别出TERTprom阴性但预后不良的ATA低风险病例（如CNIO#58）。

4. 原位检测技术开发与空间异质性
BaseScope ISH显示前体miR-139表达与qPCR结果显著相关（r=0.633，P<0.05）。数字病理分析揭示肿瘤内异质性：Ki-67增殖热点（指数≥5%）中pre-miR-139表达最低，而pre-miR-139热点区域Ki-67指数<5%，提示增殖活跃区域伴随miR-139功能缺失。

结论与展望
该研究首次通过标准化方法证实miR-139-5p可作为DTC独立预后标志物，其表达阈值（miR-139-5p^HIGH/^LOW）能有效区分预后群体，尤其弥补了现有风险分层对TERTprom阴性高风险病例的漏诊。创新的自动化ISH技术为临床整合提供可能，其与Ki-67的空间互斥性进一步强化生物学合理性。未来需前瞻性研究验证阈值普适性，但本研究已为DTC精准治疗开辟新路径——通过常规病理检测减少过度治疗，同时优化高风险患者随访策略。