稳定性指示RP-HPLC方法的开发与验证：用于新型片剂中非奈利酮及其相关物质的定量分析

本研究针对非奈利酮(FIN)在新型片剂中的质量控制需求，开发了一种稳定性指示RP-HPLC方法，可同时测定主成分及未指定杂质。研究人员通过优化色谱条件（Phenomenex C18柱，乙腈-水-TEA流动相，pH 7），实现了FIN（保留时间4.437±0.05 min）与降解产物的有效分离，并验证了方法在8-30 μg/mL（主成分）和0.2-1.4 μg/mL（杂质）范围内的线性。通过酸、碱、氧化等五种强制降解实验证实方法特异性，平均回收率达99.74%（主成分）和99.11%（杂质）。该方法成功应用于Nexifinerenone?片剂分析，并通过Complex GAPI等工具验证了绿色性，为慢性肾病(CKD)治疗药物的质量控制提供了新方案。

　　

慢性肾病(CKD)已成为全球公共卫生挑战，而非奈利酮(FIN)作为新型非甾体盐皮质激素受体拮抗剂，在CKD合并2型糖尿病患者的治疗中展现出心血管保护潜力。然而，药物制剂中的杂质可能影响疗效与安全性，现有分析方法或缺乏稳定性指示功能，或依赖LC-MS等复杂设备。针对这一瓶颈，来自赫勒万大学和坦塔大学的研究团队开发了一种高效、环保的RP-HPLC方法，相关成果发表于《Scientific Reports》。

研究采用Phenomenex C₁₈柱(4.6×250 mm, 5μm)，以乙腈-水-三乙胺(550:450:10, pH 7)为流动相，流速0.8 mL/min，在252 nm波长下实现了FIN的基线分离（保留时间4.437±0.05 min）。通过强制降解实验（酸/碱水解、氧化、光热降解）验证方法特异性，并采用ICH Q3(B)指南评估未指定杂质。样本队列来自埃及市场的Nexifinerenone?薄膜衣片（10/20 mg规格）。

方法开发与优化
通过考察pH（3-7）、有机相比例（400-700 mL乙腈）、温度（25-40°C）等参数，确定pH 7和40°C为最佳条件。FIN的log P值（2.2）和pK_a（6.06）指导了色谱柱选择，C₁₈柱在pH 7下有效抑制FIN电离，提升保留能力。

方法验证
线性范围覆盖主成分（8-30 μg/mL，r>0.9996）和杂质（0.2-1.4 μg/mL，r>0.9997），LOD/LOQ分别为2.628/7.962 μg/mL（主成分）和0.063/0.191 μg/mL（杂质）。强制降解显示FIN对碱敏感（降解率28.35%），酸降解（7.49%）和氧化（10%）次之，光热条件稳定。

实际应用
在Nexifinerenone?片剂分析中，未检出超过报告阈值（0.1%）的未指定杂质。与已发表方法相比，t检验（t_cal=1.559 < t_tab=2.306）和F检验（F_cal=3.571 < F_tab=5.050）证实方法等效性。

绿色性评估
通过Complex GAPI、MoGAPI和AGREE工具验证，该方法在减少有机溶剂消耗（550 mL乙腈/1000 mL流动相）和能源优化（40°C柱温）方面表现突出。

该研究首次建立了针对FIN片剂中未指定杂质的稳定性指示方法，填补了ICH Q3(B)合规性分析的空白。相较于LC-MS方法，其成本效益和操作简便性更适用于常规质控。强制降解数据为制剂包材选择和储存条件制定提供了依据，而绿色评估模型为分析方法的环境友好性设立了新标杆。研究成果对保障CKD治疗药物的安全性和疗效具有重要实践意义。