基于BCB染色评估不同直径卵泡来源的猪卵丘复合体对氧化应激的恢复能力差异

本研究针对基因编辑猪胚胎材料短缺问题，通过BCB染色评估了中(3-6mm)、小(1-3mm)、极小(<1mm)卵泡来源的卵丘复合体(OCCs)应对氧化应激的恢复能力。发现BCB+卵母细胞虽出现短暂ROS升高和GSH降低，但能通过NADPH调控快速重建氧化还原平衡，且恢复能力与卵泡来源显著相关，为优化体外成熟(IVM)体系提供新依据。

　　

在生物医学研究中，基因编辑猪作为理想的异种移植供体和人类疾病模型，其胚胎材料的获取效率成为关键瓶颈。传统上仅采用3-6mm中等卵泡(MF)来源的卵丘复合体(OCCs)进行体外培养，但每头青春期前母猪卵巢中1-3mm小卵泡(SF)和<1mm极小卵泡(VSF)数量更为丰富。如何利用这些"次级资源"成为提升胚胎产量的突破口。日本冈山大学的研究团队在《Theriogenology》发表的研究，通过亮甲酚蓝(BCB)染色这一评估卵母细胞成熟度的经典方法，意外发现染色过程本身会引发氧化应激，进而揭示了不同卵泡来源OCCs应对应激的独特恢复机制。

研究采用BCB染色分选、NADPH/GSH/ROS动态监测、实时荧光定量PCR等核心技术，对MF/SF/VSF来源的OCCs进行系统评估。样本来自屠宰场获取的青春期前母猪卵巢，通过机械分离获得三类直径卵泡的OCCs。

【Loss of BCB blue color in the ooplasm】
发现无论卵泡来源，BCB+卵母细胞中蓝色染料在IVM培养1小时内消失，证实所有OCCs均具有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性，能通过磷酸戊糖途径(PPP)产生NADPH还原染料。

【Change of intracellular NADPH concentration】
BCB染色后即刻检测显示，NADPH水平受卵泡来源和BCB状态双重影响：MF来源BCB+卵母细胞NADPH含量最高，VSF来源最低。染色1小时内，三类OCCs的NADPH调控模式呈现显著差异。

【氧化应激指标动态变化】
BCB+卵母细胞出现短暂活性氧(ROS)爆发和还原型谷胱甘肽(GSH)下降，但4小时IVM后恢复至基线。值得注意的是，MF来源OCCs的GSH恢复速度显著快于SF/VSF来源群体。

讨论部分指出，该研究首次阐明BCB染色会引发短暂但可逆的氧化应激，这种应激程度与卵泡发育阶段密切相关。MF来源OCCs凭借更丰富的卵丘细胞支持，能更高效地通过NADPH-GSH通路重建氧化还原平衡。这一发现不仅解释了为何MF来源OCCs在传统IVM体系中表现更优，更重要的是为优化SF/VSF来源OCCs的培养方案提供了精准调控靶点——通过补充NADPH前体或抗氧化剂，有望提升"次级卵泡"资源的利用率。研究建立的氧化应激动态监测模型，为哺乳动物卵母细胞质量评估提供了新维度。