丹麦猪群中A、B、C和H型轮状病毒的流行特征与遗传多样性研究

针对丹麦猪群腹泻病因诊断不全面的问题，哥本哈根大学团队通过设计RVB/RVC/RVH特异性RT-qPCR检测方法，对22个猪场的90份样本进行多病原筛查。研究发现RV总检出率达81.1%，其中RVB(38.9%)与RVA(37.8%)并列为优势毒株，首次揭示丹麦猪群存在G20型RVB和I13型RVC流行株。该研究为完善猪腹泻诊断体系提供了重要数据支撑，成果发表于《Veterinary Microbiology》。

　　

轮状病毒(Rotavirus, RV)作为引起幼龄动物急性胃肠炎的主要病原，在养猪业中造成严重经济损失。尽管轮状病毒A组(RVA)已被充分研究，但B组(RVB)、C组(RVC)和H组(RVH)在丹麦猪群的流行状况仍属未知领域。传统诊断方法仅针对RVA的局限性，使得临床中大量混合感染病例被漏诊，这种认知缺口严重制约了猪群腹泻病的精准防控。

针对这一科学问题，哥本哈根大学联合丹麦诊断实验室开展了一项突破性研究。研究人员创新性地建立了针对RVB(NSP3基因)、RVC(VP6基因)和RVH(VP6基因)的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测体系，其检测限达到10²-10³拷贝/μL。通过对2021-2022年间22个发病猪场的90份直肠拭子（来自1-35日龄腹泻仔猪）进行系统筛查，结合Sanger测序和进化树分析，首次绘制出丹麦猪群RV的完整流行图谱。

【主要技术方法】
研究采用QIAcube HT核酸提取系统处理样本，设计特异性引物探针建立RT-qPCR方法，通过构建质粒标准品评估检测灵敏度。对阳性样本进行VP7/VP6基因常规RT-PCR扩增，采用IQ-TREE软件进行系统发育分析。统计采用χ²检验分析年龄组差异。

【研究结果】
3.1.检测方法验证
新开发的RVB/RVC/RVH检测方法扩增效率达0.99-1.02，与RVA检测组成四联检测体系。测序验证显示RVB检测可覆盖T4-T6型，RVC检测覆盖I1-I13型。

3.2.流行率分析
95.5%猪场存在RV感染，RVA(59.1%)、RVB(54.5%)、RVC(45.5%)呈广泛分布。17.8%病例存在2-3种RV共感染，其中RVA-RVB-RVC三重感染占6.7%。值得注意的是，22-35日龄猪群中RVB检出率高达71.4%。

3.3.遗传进化特征
VP7基因分型发现丹麦RVB以G20型为主（与美越毒株亲缘最近），同时检出G12和G16型。RVC的VP6基因以I13型为主导（与捷克和美国毒株相似度89.8-94.4%），而唯一RVH毒株属于I1基因型临界株。

【结论与意义】
该研究颠覆了"RVA是猪腹泻唯一主要RV病原"的传统认知，证实RVB在丹麦猪群的流行强度与RVA相当。发现G20型RVB和I13型RVC可能形成地域性流行谱系，为疫苗研发提供靶点。建立的多元检测体系将临床RV检出率提升至81.1%，显著提高腹泻病因诊断效率。作者建议将RVB/RVC纳入常规检测 panel，这对完善猪群肠道疾病防控策略具有里程碑意义。

特别值得注意的是，研究揭示的年龄分布特征显示：RVB在生长猪群（22-35日龄）中占主导地位，这一发现为制定阶段化防控方案提供了科学依据。而RVH的低检出率（1.1%）提示其可能更适合作为机会性病原监测指标。该成果不仅填补了北欧地区RV流行病学数据空白，其建立的方法学框架也为其他动物RV研究提供了范本。