修饰与非修饰mRNA疫苗的高剂量重复接种：恒河猴模型中先天与适应性免疫反应的比较研究

（编辑推荐）本研究系统比较了核苷修饰（N1-methylpseudouridine）与非修饰mRNA疫苗在恒河猴模型中高剂量重复接种的免疫原性差异。通过多组学分析揭示：两种mRNA均能激活I型干扰素（IFN-α）、抗原呈递相关基因（如CD14+ CD16+单核细胞）及炎症因子（IL-6/IL-7），但诱导的细胞因子谱存在差异（未修饰mRNA更显著激活TLR7/8通路）。值得注意的是，尽管先天免疫激活模式不同，二者最终产生相似的gag特异性抗体和T细胞应答，为癌症疫苗（如mRNA-4157联合PD-1抑制剂）的优化设计提供了关键数据。

　　

免疫激活的动态特征
研究团队在恒河猴模型中对比了160 μg未修饰mRNA与400/800 μg修饰mRNA的重复接种效果。24小时内的免疫监测显示，两组均引发CD14⁺ CD16⁺中间单核细胞、浆细胞样树突细胞（pDC）和中性粒细胞的瞬时扩增，伴随I型干扰素（IFN-α）和炎症因子（IL-1RA、CXCL11）的分泌。未修饰mRNA显著提升IL-7（2.3倍）和IFN-α水平（p<0.01），而修饰mRNA则更易诱导IL-6（高剂量组达1.8倍），这种差异暗示TLR7/8通路在未修饰mRNA中的更强激活。

转录组的剂量依赖性调控
RNA测序揭示：高剂量修饰mRNA（800 μg）在第五次接种后差异表达基因（DEGs）数量激增（从1,152增至1,894），显著高于未修饰组（稳定在800-900个）。基因集富集分析（GSEA）显示所有组别均上调I型干扰素信号（如ISG15）、抗原加工呈递（MHC-II类分子）相关模块。有趣的是，尽管IL-6通路基因在所有组别中均显著激活（NES>2.5），但蛋白检测显示其表达水平与mRNA修饰状态明确相关。

适应性免疫的趋同演化
尽管先天免疫存在差异，所有组别在第五次接种后均产生高滴度gag特异性IgG（ED₅₀>10⁵），且记忆T细胞应答特征相似：CD4⁺ T细胞以CCR7^-CD45RA^-效应记忆表型为主（占比62%±8%），CD8⁺ T细胞则呈现CD69⁺4-1BB⁺活化标志。值得注意的是，剂量翻倍并未进一步提升T细胞应答强度，提示免疫应答可能已达平台期。

临床转化的启示
研究特别指出，未修饰mRNA的强效TLR激活特性（如IL-7分泌）可能有利于癌症疫苗设计——临床试验NCT01881867已证实IL-7可增强肿瘤抗原特异性T细胞扩增。而修饰mRNA的高剂量耐受性（800 μg仅引发轻度IL-6升高）则适用于需频繁接种的个体化新抗原疫苗（如mRNA-4157）。研究者强调，恒河猴对mRNA炎症反应的抵抗性强于人类，实际临床中需谨慎评估剂量 escalation策略。

技术细节的突破
通过添加gag/env序列作为spike-in对照，团队首次在转录组中捕获到疫苗mRNA的体内分布证据。值得注意的是，加强免疫后gag表达量降低约40%，提示预先存在的抗体和T细胞可能清除mRNA转染细胞。这一发现为理解重复接种的效力衰减提供了新视角。

未解之谜与展望
尽管观察到第五次接种后高剂量组DEGs增加，但表观遗传分析未发现训练免疫（trained immunity）的证据。研究者推测，这种短暂增强更可能源于LNP（脂质纳米颗粒）的累积效应而非表观记忆。未来研究将聚焦于如何利用不同mRNA构件的免疫偏好性（如未修饰mRNA的IL-7优势）来优化治疗性疫苗的配伍设计。