同位素稀释LC-MS/MS建立血浆和尿液3-甲氧基酪胺候选参考测量程序及其在中国百家实验室的应用评价

【编辑推荐】本研究针对临床3-甲氧基酪胺(3MT)检测结果可比性差的难题，建立了基于同位素稀释LC-MS/MS(ID-LC/MS/MS)的候选参考测量程序(cRMP)，验证其精度(CV≤4.03%)和回收率(99.51%-104.61%)后，对全国100余家实验室进行标准化评估，发现常规LC-MS/MS存在显著系统性偏差，为神经内分泌肿瘤和帕金森病诊断标准化提供高阶溯源依据。

　　

在神经内分泌肿瘤和神经退行性疾病的诊断领域，3-甲氧基酪胺(3-methoxytyramine, 3MT)作为多巴胺代谢的关键标志物，其精准检测直接影响嗜铬细胞瘤/副神经节瘤(PPGLs)的恶性风险评估和帕金森病的早期诊断。尽管液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术已成为3MT检测的金标准，但中国国家临床检验中心(NCCL)的外部质量评估(EQA)数据显示，不同实验室间检测结果的变异系数(CV)高达22.42%，这种"数据孤岛"现象严重制约了临床决策的可靠性。

为破解这一标准化困局，国家临床检验中心的研究团队Zijia Ma等开展了一项里程碑式研究。通过建立符合ISO 15193标准的同位素稀释LC-MS/MS(ID-LC/MS/MS)候选参考测量程序(cRMP)，并采用SI国际单位制可溯源的Cerilliant标准品(M?171?1ML)，研究者首次为中国临床实验室提供了3MT检测的"分子尺"。该工作近期发表于《Clinica Chimica Acta》，不仅揭示了常规检测方法的系统性偏差，更构建了从参考方法到常规检测的溯源链条。

关键技术方法包括：1) 采用同位素标记内标(3MT-D4)和固相萃取(SPE)前处理；2) 建立覆盖0.014-49.978 nmol/L的线性范围(R²=0.9999)；3) 对NCCL提供的4种EQA样本(202411-202414)进行靶值赋值；4) 组织全国百余家实验室进行方法学比对。

【结果】

1. 方法学验证：cRMP展现卓越性能，日内精密度0.97%-3.85%，总精密度0.99%-4.03%，检测限(LOD)低至0.004 nmol/L。同位素内标校正使基质效应回收率达99.51%-104.61%。

2. 实验室间差异：对比cRMP赋值靶值，常规LC-MS/MS实验室在低浓度血浆样本(0.063 nmol/L)呈现显著偏差，部分实验室结果偏离靶值超过50%，证实当前EQA高变异系数的技术根源。

3. 临床应用价值：研究发现3MT检测标准化对PPGLs恶性风险评估具特殊意义，其诊断效能优于去甲变肾上腺素(normetanephrine)，尤其在头颈部副神经节瘤中，3MT异常升高与肿瘤分泌活性呈强相关性。

【结论与意义】
该研究建立的cRMP通过三重技术突破实现检测标准化：①采用SI可溯源标准物质确保量值传递准确性；②通过同位素稀释技术克服基质效应；③建立<4.03%的精密度控制标准。研究首次系统揭示中国LC-MS/MS实验室3MT检测的"蝴蝶效应"——微小方法学差异经多级放大导致临床决策风险，这一发现为NCCL后续制定《液相色谱-质谱临床应用指南》提供了实验依据。

值得注意的是，研究者特别指出当前3MT检测差异主要源于三大技术痛点：校准品溯源链断裂、离子对选择缺乏共识、样本前处理异质性。该cRMP的推广将显著提升PPGLs恶性风险评估和帕金森病早期诊断的可靠性，尤其对鉴别多巴胺分泌型肿瘤具有不可替代的价值。未来通过建立基于该cRMP的二级参考物质和标准化操作程序(SOP)，有望使中国3MT检测质量达到国际临床化学联合会(IFCC)标准要求。