磷霉素与氟氯西林协同抗甲氧西林敏感及耐药金黄色葡萄球菌的体外体内评估及治疗潜力

这篇研究通过棋盘法、时间-杀菌曲线和蜡螟幼虫模型，系统评估了磷霉素（FOF）与氟氯西林（FLX）联用对甲氧西林敏感（MSSA）和耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）的协同作用。结果显示：联合用药可使MRSA菌株MIC降低64倍，显著提高体内存活率（MRSA达70%）；基因表达分析揭示FLX单药可能上调毒力因子（如lukED），而FOF能逆转此效应。该组合为无药敏结果时的经验性治疗或MRSA挽救疗法提供了新选择。

　　

Abstract
磷霉素（FOF）作为广谱抗菌剂常被用于联合治疗。先前体外研究表明FOF与氟氯西林（FLX）联用对金黄色葡萄球菌具有协同效应。本研究通过体外和蜡螟（Galleria mellonella）体内模型验证该协同作用，涵盖5株甲氧西林和FOF敏感株（ATCC-29213及4株临床分离株）、1株双重耐药株（DSMZ-23622）和4株MRSA但FOF敏感株（ATCC-33592及3株临床分离株）。棋盘法显示联合用药呈相加或协同效应，时间-杀菌曲线证实联用组细菌载量（TBC）降低更显著。体内实验中，FOF+FLX使MRSA（ATCC-33592）和MSSA（ATCC-6538）幼虫死亡率分别降低48%和40%，且显著减少血淋巴TBC。值得注意的是，FLX单药可能通过上调lukED等毒力因子加重感染，而FOF能抑制此效应。

Introduction
抗生素滥用导致的多重耐药已成为21世纪重大健康挑战，仅欧盟每年约2.5万人死于耐甲氧西林葡萄球菌感染。FOF通过干扰细胞壁合成发挥抗菌作用，其与β-内酰胺类（如亚胺培南）联用已在MRSA菌血症等重症感染中展现潜力。FLX对MSSA的MIC₅₀/MIC₉₀仅0.2/0.39 mg/L，本研究首次系统评估FOF+FLX对MRSA/MSSA的协同机制。

Materials and methods
采用含葡萄糖-6-磷酸（G6P）的Mueller-Hinton肉汤进行微量稀释法药敏试验。通过棋盘法计算分级抑菌浓度指数（FICI≤0.5为协同）和敏感折点指数（SBPI≥2表临床有效）。时间-杀菌曲线选取2株MSSA和2株MRSA（含FOF耐药株DSMZ-23622），监测0-24h菌落数变化。蜡螟模型注射7×10⁸ CFU/mL菌悬液后，给予单药或联用（如FOF 0.2 mg/kg+FLX 85 mg/kg），记录5天存活率。qPCR检测agrA、hla和lukED毒力基因表达。

Results

1. 药敏与协同：联用使MRSA菌株FLX MIC从1024 mg/L降至16 mg/L（64倍），SBPI最高达139。
2. 时间-杀菌：联用组24h内对MSSA实现2 log₁₀ CFU/mL持续杀菌，对MRSA前10h达3 log₁₀降低。
3. 体内实验：FOF+FLX使MRSA感染幼虫存活率从对照3%提升至70%（p<0.0001），但特定MSSA株（ATCC-29213）中FLX单药反致存活率降至18%。
4. 毒力调控：1/2 MIC FLX使lukED表达上调2.9倍，而5 MIC FOF可抑制至0.04倍。

Discussion
本研究首次揭示FOF能抵消FLX诱导的毒力因子激活，这与蜡螟模型中FLX单药疗效差异相关。尽管G. mellonella模型存在局限，其结果与临床前数据吻合：FOF+FLX对MRSA的显著协同（SBPI>130）支持其作为传统MRSA药物失败后的挽救方案。未来需临床验证该组合在人工关节感染等场景的应用价值。