HBx突变体调控的RPL13AP25介导恩替卡韦次优病毒学应答与肝癌进展的分子机制

本研究针对慢性乙型肝炎患者接受恩替卡韦治疗时出现的次优病毒学应答现象，揭示了HBx-H94Y/K130M突变体通过上调假基因来源的长链非编码RNA RPL13AP25，促进cccDNA积累和eIF4EBP1超磷酸化，最终驱动肝癌发展的新机制。该发现为临床预测肝癌风险和开发靶向治疗策略提供了重要理论依据。

　　

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染全球影响约2.5亿人，是肝衰竭和肝细胞癌（HCC）的主要诱因。虽然恩替卡韦等核苷（酸）类似物（NUCs）能有效抑制病毒复制，但约18%患者会出现次优病毒学应答——即治疗后6个月仍可检测到HBV DNA。这种临床困境背后隐藏着怎样的分子黑箱？更关键的是，这些患者为何具有更高的HCC发生风险？

来自长庚纪念医院肝脏研究中心的研究团队通过443例恩替卡韦治疗患者的队列分析，首次发现次优应答是HCC发生的独立预测因子（P<0.001）。在6例发展为HCC的患者中，5例检测到HBx基因突变，其中HBx-H94Y/K130M突变体表现尤为突出。研究人员通过RNA测序等技术锁定假基因来源的RPL13AP25是该突变体的关键效应分子，其表达水平与患者不良预后显著相关（P<0.05）。

研究采用的主要技术包括：1）443例临床队列的回顾性分析；2）HBx基因Sanger测序；3）RNA测序和TCGA数据库生物信息学分析；4）体外迁移实验（Transwell）和cccDNA检测；5）SCID小鼠尾静脉注射模型评估转移能力；6）Western blot检测eIF4EBP1磷酸化水平。

【次优应答和生存结局分析】
通过多因素Cox回归模型证实，次优应答患者HCC风险增加3.2倍（P=0.003）。值得注意的是，所有HCC病例均发生在次优应答组，且与肝硬化无关（P=0.729），提示这是独立于肝纤维化进程的致癌途径。

【HBx-H94Y/K130M增强cccDNA积累】
在鉴定的5种HBx突变体中，HBx-H94Y/K130M使HepG2.2.15细胞的cccDNA水平提升2.8倍（P<0.01），并显著增强细胞迁移能力（P<0.01）。这种"双突变双打击"效应提示病毒进化出逃逸治疗压力的新策略。

【RPL13AP25的临床相关性】
TCGA数据显示RPL13AP25在HCC组织高表达（P<0.05），患者5年生存率降低42%。实验证实其过表达可促进：1）细胞迁移（Transwell显示增加2.1倍）；2）肺转移（小鼠模型转移指数提升1.8倍）；3）cccDNA积累（增加1.5倍）；4）脂滴形成（BODIPY染色阳性率提高65%）。

【eIF4EBP1超磷酸化机制】
Western blot揭示HBx-H94Y/K130M/RPL13AP25轴使eIF4EBP1在T37/46、S65和T70位点磷酸化水平提升2-3倍，导致其与eIF4E解离，激活蛋白翻译机器。临床样本验证显示HBx-H94Y/K130M患者p-eIF4EBP1(T70)水平是野生型的2.3倍（P<0.05）。

这项研究首次绘制出"次优应答→HBx突变选择→RPL13AP25激活→翻译重编程→HCC进展"的完整通路。不仅为临床监测提供新型生物标志物（如HBx-H94Y/K130M突变和RPL13AP25表达），更揭示靶向eIF4EBP1磷酸化可能成为阻断病毒致癌的新策略。值得注意的是，该研究发现的脂代谢重编程现象，为理解HBV劫持宿主能量代谢的机制开辟了新视角。

Yang-Hsiang Lin等学者的工作突破了传统"病毒载量中心论"的局限，证明即使低水平病毒血症（<2000 IU/mL）仍可能通过表观遗传调控驱动癌变。这些发现将促使临床重新评估次优应答患者的治疗策略，并为开发靶向RPL13AP5/eIF4E通路的联合治疗方案奠定基础。