具有“攻防”效应的核酸纳米凝胶增强化疗-免疫协同治疗

本研究针对化疗-免疫协同治疗中CD8+ T细胞耗竭的关键瓶颈，开发了一种膜包被框架核酸纳米凝胶（RM@NG/DOX），通过共递送阿霉素（DOX）和靶向TOX的siRNA（siTOX），实现“激活-逆转”双通路调控。该体系突破传统siRNA阳离子载体模式，通过DOX诱导免疫原性细胞死亡（ICD）增强T细胞浸润，同时siTOX沉默耗竭关键调控因子TOX，成功将“冷肿瘤”转化为免疫敏感的“热肿瘤”，为协同治疗提供新策略。

　　

肿瘤治疗领域长期面临一个矛盾：化疗药物如阿霉素（DOX）虽能通过诱导免疫原性细胞死亡（ICD）激活CD8⁺ T细胞抗肿瘤免疫，但持续的抗原刺激又会导致这些T细胞耗竭，表现为PD-1⁺ Tim-3⁺表型的上调，最终削弱治疗效果。这种“边激活边耗竭”的困境，使得“冷肿瘤”（免疫浸润不足）难以转化为“热肿瘤”。更棘手的是，传统siRNA递送依赖阳离子载体，面临电荷毒性平衡难题。如何打破这些壁垒，成为优化化疗-免疫协同治疗的关键。

山东大学等机构的研究人员独辟蹊径，设计了一种“攻防兼备”的核酸纳米凝胶RM@NG/DOX。该系统以框架核酸（FNA）为骨架，通过碱基互补配对将siTOX作为交联链构建纳米凝胶（NG），并利用π-π相互作用负载DOX；外层包裹cRGD修饰的红细胞膜（RM），形成双重屏障保护药物。这种设计不仅规避了传统阳离子载体的缺陷，还通过靶向递送实现“时空协同”——DOX作为“进攻信号”诱导ICD，siTOX作为“防御模块”沉默T细胞耗竭关键调控因子TOX。研究发表于《Journal of Controlled Release》，为逆转免疫抑制微环境提供了新范式。

关键技术方法

1. 框架核酸纳米凝胶构建：通过FNA与siTOX杂交自组装形成纳米凝胶，凝胶电泳和TEM验证结构；
2. 膜包被技术：提取红细胞膜并修饰cRGD肽，通过挤压法包裹纳米凝胶；
3. 体内外功能验证：采用流式细胞术分析T细胞耗竭标志物（PD-1⁺ Tim-3⁺），ELISA检测细胞因子，小鼠模型评估肿瘤抑制与转移。

研究结果

Preparation and stability of RM@NG
通过优化FNA与siTOX比例（1:2）获得均一纳米凝胶，电泳显示siTOX被有效包裹。RM涂层显著增强血清稳定性，cRGD修饰使肿瘤富集效率提高2.3倍。

Conclusions
RM@NG/DOX通过双重机制重塑免疫微环境：DOX促进树突细胞（DC）成熟和CD8⁺ T细胞浸润，siTOX下调TOX使耗竭T细胞恢复杀伤功能。小鼠模型中，该系统使肿瘤体积缩小68%，肺转移结节减少83%，且显著延长生存期。

讨论与意义
该研究首次将核酸纳米凝胶与膜包被技术结合，突破siRNA递送的传统范式。TOX作为耗竭调控“总开关”的靶向干预，为克服PD-1/ Tim-3免疫检查点耐药提供新思路。从转化医学角度看，这种“化疗-基因”协同策略可扩展至其他免疫调节靶点，为“冷肿瘤”治疗开辟可编程的纳米药物设计路径。