全血快速免疫分析揭示HBV特异性T细胞应答异质性：超越临床分期的免疫标志物探索

针对慢性乙型肝炎(CHB)缺乏免疫学标志物的临床困境，研究人员开发了HBV-细胞因子释放检测法(HBV-CRA)，通过全血快速检测揭示HBV特异性T细胞功能模式。该研究在235例CHB患者队列中发现，IL-2/IFN-γ水平与HBsAg清除相关，且免疫应答模式独立于传统临床分期。这项发表于《Journal of Hepatology》的成果为个体化免疫治疗策略提供了新型监测工具。

　　

慢性乙型肝炎(CHB)影响着全球近3亿人，尽管现有抗病毒治疗能抑制病毒复制，但功能性治愈率不足10%。核心问题在于患者体内HBV特异性T细胞存在严重功能缺陷——这些细胞频率低至总T细胞的0.1%以下，且表现出复杂的异质性：既有耗竭标志物(如PD-1、TIM-3)表达差异，又存在细胞因子分泌能力不均等。更棘手的是，这种免疫缺陷无法通过常规病毒学指标(HBsAg、HBV-DNA)或肝功能检测(ALT)准确评估。新加坡科技研究局(A*STAR)等机构的研究团队在《Journal of Hepatology》发表突破性成果，开发出全血HBV-细胞因子释放检测法(HBV-CRA)，首次系统描绘了CHB患者HBV特异性T细胞的功能图谱。

研究采用覆盖HBV基因型A-D的6组重叠肽段库(核心蛋白Core、表面抗原S、前S区PreS、聚合酶Pol-1/Pol-2和X蛋白)，在320μL全血中刺激16小时后，通过自动化ELISA定量7种细胞因子(IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-5、IL-10、GrzB)。关键技术包括：1) 工程化HBV-Env_183-91-TCR T细胞梯度稀释验证灵敏度；2) 与传统IFN-γ ELISpot平行比较；3) 对235例CHB患者(含治疗初治、NUC抑制、HBsAg阴性等亚组)进行横断面分析；4) 采用UMAP降维和PhenoGraph聚类解析免疫特征。

敏感性验证
通过梯度稀释实验证实，HBV-CRA可检测低至0.02%-0.04%频率的HBV特异性T细胞，灵敏度显著优于ELISpot。当50-100个HBV-Env_183-91特异性T细胞(模拟CHB患者体内水平)存在时，即可检测到>10 pg/mL的IFN-γ和GrzB分泌。

免疫特征解析
在CHB患者中，80%可检测到HBV特异性T细胞应答，但呈现显著异质性：S肽段库最常诱发IFN-γ/IL-2反应(60%-70%患者)，而Core和Pol-2反应率分别为40%和50%。值得注意的是，NUC治疗显著改变功能谱——治疗组患者GrzB分泌减少，而功能性治愈患者中47.6%表现为纯IFN-γ/IL-2应答，与自发缓解患者(仅4.6%)形成对比。

急性感染动态
对9例急性HBV(AHB)患者的纵向监测显示，Core肽段刺激产生的IL-2/IFN-γ水平与HBsAg清除呈正相关。病毒清除期患者呈现独特的"高IL-2+高IFN-γ±低GrzB"特征，该特征在部分CHB患者中同样存在，提示可能预示良好预后。

免疫分型突破
通过UMAP-PhenoGraph算法将患者分为13个功能亚群。关键发现包括：1) AHB患者集中于C1-C3簇(高Th1细胞因子)；2) 治疗初治患者多分布在C3-C7簇(高GrzB)；3) NUC治疗组偏向C1/C2簇(低细胞毒性)。这种分型完全独立于传统临床分期，例如同属HBeAg阴性肝炎的患者可能呈现截然不同的免疫特征。

该研究开创性地证明，HBV-CRA作为一种床旁检测技术，能突破现有临床分期的局限，通过"免疫指纹"识别可能受益于特定干预的患者亚群。尤其重要的是，研究发现NUC治疗会重塑T细胞功能谱(降低GrzB)，这为理解核苷类药物免疫调节作用提供了新视角。尽管存在无法区分CD4⁺/CD8⁺亚群等局限，这种仅需2.5mL全血的检测方案，为CHB的精准免疫治疗决策提供了切实可行的工具。未来研究可进一步探索IL-2/GrzB比值等参数作为停药后持续应答的预测标志，或用于优化治疗性疫苗组合策略。