CRISPR/Cas9介导的CISH基因敲除肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的临床制备及其在胃肠道癌症治疗中的突破性应用

本研究针对晚期胃肠道癌症患者生存率低的临床难题，创新性地利用CRISPR/Cas9技术敲除肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中的免疫检查点蛋白CISH基因，显著提升T细胞的扩增能力、功能亲和力及细胞因子多效性。研究人员通过cGMP标准下的规模化制备，成功完成首个人体临床试验（NCT04426669），为转移性GI癌症患者提供了新型细胞治疗策略。

　　

研究背景与意义
胃肠道癌症（GI cancers）是全球癌症相关死亡的主要原因之一，其中晚期结直肠癌患者的五年生存率仅为15%。尽管免疫治疗在部分癌症中取得突破，但GI癌症对传统疗法响应有限。肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法虽具潜力，但体内免疫抑制微环境（如CISH蛋白介导的信号通路）限制了其疗效。此前动物研究表明，敲除CISH可显著增强T细胞抗肿瘤活性，但如何将这一发现转化为临床级治疗方案仍是重大挑战。

研究方法与技术
美国明尼苏达大学的研究团队开发了一套完整的cGMP（现行良好生产规范）流程：从患者肿瘤组织中分离突变反应性（MR）TIL，通过电转Cas9 mRNA和化学修饰sgRNA实现CISH基因敲除，随后在含IL-2/IL-7/IL-15的培养基中扩增，并使用G-Rex^?培养系统进行规模化生产。研究纳入20例GI癌症患者（结肠癌10例、直肠癌8例等），通过外显子测序筛选新抗原，最终对19份样本完成编辑和扩增。

研究结果

1. 材料与方法：TIL培养体系实现平均327.1倍的扩增，终产品活率76%（SD 13%），CD3⁺纯度94.4%，CISH敲除效率达75%（最高96%）。
2. 临床转化：13例患者接受治疗，5例因疾病进展未完成输注。所有产品均通过无菌检测、内毒素检测等质控标准，IFN-γ分泌功能正常。
3. 分子验证：Western blot证实CISH蛋白表达缺失，DNA测序显示平均编辑效率59.9%（范围0.4%-86%）。

结论与展望
该研究首次实现CRISPR/Cas9编辑TIL的临床级生产，证实CISH敲除可安全应用于人体。尽管部分产品活率低于70%，但整体工艺稳定性和治疗效果为后续优化奠定基础。这项发表于《Cytotherapy》的成果不仅推动了个性化细胞治疗的发展，更为联合免疫检查点抑制剂（如PD-1阻断剂）提供了新思路。未来需扩大样本量验证长期疗效，并探索CISH与其他免疫调节靶点的协同作用。