靶向LPAR4的双载药脂质体协同抑制肺癌生长与转移的纳米治疗策略

肺癌作为全球癌症死亡的首要原因，其转移特性严重制约治疗效果。本研究创新性地构建了靶向LPAR4的双载药脂质体（LPAR4-LP-ATN161/DOX），通过共递送化疗药物多柔比星（DOX）和整合素α5β1拮抗剂ATN161，实现了对肿瘤起始细胞（TICs）的特异性靶向和微环境重塑。实验证实该体系显著增强肿瘤部位药物蓄积，同步抑制LPAR4/AKT/CREB通路与纤维连接蛋白-整合素互作，有效阻断肺癌生长与转移，为临床治疗提供了新思路。

　　

肺癌长期占据全球癌症死亡率首位，其高死亡率主要归因于肿瘤转移和治疗抵抗。尽管化疗药物如多柔比星（DOX）在临床广泛应用，但存在靶向性差、系统毒性高和无法有效抑制转移等瓶颈。近年研究发现，肿瘤起始细胞（TICs）在应激条件下会瞬时高表达溶血磷脂酸受体4（LPAR4），通过激活LPAR4/AKT/CREB信号轴促进纤维连接蛋白分泌，进而通过整合素α5β1介导的粘附作用驱动转移。然而，传统单靶点策略难以同时阻断"种子"（TICs）和"土壤"（转移微环境）的恶性循环。

针对这一难题，吉林大学的研究团队在《European Journal of Pharmaceutical Sciences》发表了一项突破性研究。他们设计了一种靶向LPAR4的双载药脂质体（LPAR4-LP-ATN161/DOX），通过将抗LPAR4抗体偶联至共载DOX和ATN161的脂质体表面，实现了三重协同机制：特异性靶向TICs、直接杀伤肿瘤细胞和破坏转移微环境。

研究采用乙醇注入法制备脂质体，通过跨膜铵盐梯度法实现DOX高效装载，并利用DSPE-PEG₂₀₀₀-NHS连接抗体。采用动态光散射（DLS）、纳米颗粒追踪分析（NTA）和场发射扫描电镜（FE-SEM）表征纳米颗粒特性。体外实验选用高表达LPAR4的A549和LLC细胞系，通过MTT法、流式细胞术和共聚焦显微镜评估细胞毒性、摄取机制及内化途径。通过划痕实验、Transwell和线粒体膜电位检测分析抗转移效果。建立A549异种移植瘤模型，利用活体成像系统（IVIS）评估体内靶向性，并通过H&E染色、TUNEL和免疫荧光分析治疗效果。

3.1 双载药脂质体的构建与表征
研究团队优化出最佳药物-脂质比例（ATN161:脂质=1:15，DOX:脂质=1:12），获得的LPAR4-LP-ATN161/DOX粒径141.9±1.9 nm，电位-1.71 mV，包封率超过85%。电镜显示其呈规则球形，7天内粒径与PDI保持稳定。Western blot证实抗体有效偶联，且脂质体对IgG的吸附在2:1（抗体:脂质体）比例时达到饱和。

3.2 靶向性与细胞毒性
LPAR4在肺癌细胞中的表达量显著高于正常细胞（A549中达5.8倍）。LPAR4修饰使脂质体在A549细胞的摄取量提升3.2倍，主要通过网格蛋白依赖的内吞途径内化。双载药体系对A549的半数抑制浓度（IC₅₀）为2 μg/mL DOX当量，较非靶向组毒性增强1.7倍。

3.3 抗转移机制验证
划痕实验显示LPAR4-LP-ATN161/DOX处理24小时后细胞迁移率降低78%。该体系通过下调LPAR4 mRNA（减少63%）和蛋白表达，阻断AKT/CREB通路，同时ATN161抑制纤维连接蛋白-α5β1整合素结合，使E-钙黏蛋白表达恢复2.1倍，波形蛋白降低72%。JC-1检测显示线粒体膜电位下降81%，ROS水平升高4.3倍，证实协同诱导凋亡。

3.4 体内治疗效果
在裸鼠模型中，靶向组肿瘤蓄积量是非靶向组的4.5倍。治疗15天后，靶向组肿瘤体积抑制率达73%，重量减轻68%，且心、肝、肾指标与空白组无显著差异。TUNEL显示靶向组凋亡细胞占比达54%，Ki67阳性率降低82%。免疫组化证实肿瘤组织LPAR4表达降低89%。

4. 讨论与结论
该研究创新性地提出"动态靶标捕获-微环境重编程"协同策略：利用LPAR4抗体的时空靶向性锁定应激状态下的TICs，通过脂质体缓释特性实现DOX与ATN161的序贯释放。ATN161破坏纤维连接蛋白网络，阻断"土壤"支持；DOX直接清除"种子"细胞，而LPAR4抑制则从源头切断转移信号传导。相较于临床使用的聚乙二醇化脂质体（如Doxil^?），该体系将肿瘤抑制率从40%提升至73%，且心脏毒性显著降低。

研究突破传统纳米药物的被动靶向局限，通过动态捕获瞬时表达的LPAR4实现精准递送。但需注意LPAR4表达的时空异质性可能影响治疗效果，未来需结合影像技术优化给药时机。该工作为肺癌的纳米联合治疗提供了新范式，其靶向原理可拓展至其他应激响应型受体，具有重要的临床转化价值。