蟾皮-威灵仙药对通过调节肠道菌群失衡抑制结直肠癌HT-29细胞增殖迁移的机制研究

本研究针对结直肠癌(CRC)与肠道菌群失调的关联性难题，贵州中医药大学附属第一医院团队通过建立伪无菌大鼠模型，探究蟾皮-威灵仙药对在不同肠道菌群状态下对HT-29细胞的抑制作用。研究发现正常菌群代谢产生的含药血浆显著抑制癌细胞增殖迁移(p<0.01)，而菌群失调会削弱药效(p<0.05)，同时该药对可修复抗生素导致的CD3+/CD4+/CD8+比例失衡。该成果为CRC治疗提供了菌群-药物互作的新视角。

　　

结直肠癌(CRC)作为全球第三大高发恶性肿瘤，其发生发展与肠道菌群失调密切相关。当肠道中促癌菌如pks⁺大肠杆菌增加而益生菌如双歧杆菌减少时，会通过慢性炎症和代谢异常促进肿瘤进展。传统中药蟾皮和威灵仙组成的药对在临床抗肿瘤中显示潜力，但其作用机制与肠道菌群的关联尚未阐明。

贵州中医药大学附属第一医院Xue-yan Wang等研究人员通过建立伪无菌大鼠模型，首次系统研究了蟾皮-威灵仙药对在不同肠道菌群状态下的药效差异。研究发现抗生素诱导的菌群失调会导致大鼠体重异常增加(p<0.01)、脾脏系数降低(p<0.01)以及CD4⁺/CD8⁺比例失衡(p<0.01)。通过非靶向代谢组学鉴定出271种差异代谢物，其中脂质类占32.66%。关键靶点分析显示PPARγ和TNF-α是同时调控CRC和菌群失调的核心靶点。

研究采用伪无菌大鼠模型构建、流式细胞术、非靶向代谢组学(UPLC-Q-Exactive Plus)和细胞功能实验等技术。收集20只SPF级Wistar大鼠分为正常组、模型组等4组，通过抗生素鸡尾酒法建立模型。采用5倍临床等效剂量(13.05 g/kg)灌胃给药，通过CCK-8、划痕实验等评估药效。

实验结果

1. 大鼠体重及器官系数：模型组体重显著增加(p<0.01)，脾脏系数降低(p<0.01)，给药后CD4⁺比例回升(p<0.01)。
2. 肠道菌群培养：血琼脂培养基显示模型组大肠杆菌占优，而给药组乳酸杆菌增加。双歧杆菌培养基中模型组菌落稀少，给药后有所恢复。
3. 代谢组学分析：OPLS-DA模型(R²Y=0.988)筛选出27个关键代谢物如甘氨胆酸和猪去氧胆酸。
4. 细胞实验：正常菌群代谢的含药血浆(20%浓度)对HT-29细胞抑制率最高(p<0.01)，划痕愈合率最低(p<0.01)。
5. 靶蛋白检测：Western Blot显示正常+TCM组PPARγ、TNF-α和NF-κB表达显著降低(p<0.01)。

结论与意义
该研究揭示蟾皮-威灵仙药对与肠道菌群存在双向调控：一方面菌群失调会通过改变药物代谢削弱其抑制HT-29细胞增殖迁移的效果；另一方面该药对可修复菌群失衡，恢复免疫细胞平衡。这为CRC的菌群-药物联合治疗策略提供了实验依据，同时提示临床需关注患者肠道微生态对中药疗效的影响。研究创新性地将传统中药药效评价与微生物组学结合，发表于《Cancer Cell International》杂志。