m6A甲基化修饰在脓毒症急性呼吸窘迫综合征中的潜在机制探索：生物信息学与实验验证

本研究针对脓毒症急性呼吸窘迫综合征（ARDS）缺乏特异性治疗的问题，通过单细胞和bulk RNA测序分析，揭示WTAP介导的m6A甲基化通过调控MYC表达和免疫细胞浸润促进ARDS进展，为靶向干预提供新思路。

　　

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）作为重症监护病房高死亡率疾病，其发病机制与脓毒症密切相关，但当前缺乏有效治疗手段。N6-甲基腺苷（m6A）作为RNA最常见化学修饰，在多种病理过程中起调控作用，但其在ARDS微环境中的作用尚未明确。浙江大学的研究团队通过整合单细胞和转录组数据，首次系统解析了m6A修饰在脓毒症ARDS中的分子机制。

研究采用GSE151263（3例ARDS患者单细胞数据）和GSE65682（241例脓毒症患者芯片数据）两个GEO数据库数据集。关键技术包括：单细胞聚类分析（Seurat包）、细胞通讯网络构建（iTALK）、伪时序分析（Monocle2）、共识聚类（ConsensusClusterPlus）、加权基因共表达网络（WGCNA），以及LPS诱导的小鼠ARDS模型实验验证。

微环境中11种细胞类型的注释
通过t-SNE降维分析鉴定出CD4⁺初始T细胞、单核细胞等11种细胞亚群。其中NK细胞和CD8⁺T细胞表现出显著升高的焦亡评分，而单核细胞中凋亡评分最高。

表型评分与m6A相关基因表达
AUCell分析显示m6A甲基化评分在所有细胞类型中均较高，其中WTAP、HNRNPA2B1和HNRNPC表达最广泛，提示这些调节因子可能主导ARDS进程。

细胞通讯与轨迹分析
细胞互作网络揭示CD8⁺T细胞通过TGFB1-CXCR4通路与初始B细胞通讯，血小板则激活BTLA-CD247信号通路。伪时序分析显示单核细胞和NK细胞在病程早期活跃，后期以T细胞为主。

差异基因富集与共识聚类
GO分析发现差异基因富集于内肽酶活性调控等过程，KEGG通路主要涉及沙门氏菌感染。基于差异基因的共识聚类将脓毒症患者分为3个亚群，其中Cluster 1患者生存率最低且WTAP表达显著升高。

枢纽基因鉴定
WGCNA分析确定棕色模块与WTAP相关性最强，包含MYC等5个枢纽基因。生存分析显示高表达WTAP和MYC的患者预后更差。

实验验证
LPS诱导的ARDS小鼠模型中，WTAP siRNA干预可显著降低肺组织m6A水平（ELISA验证）、减轻肺水肿（湿/干重比下降），并抑制炎症因子（IL-6、TNF-α等）释放。电镜观察证实WTAP敲除能保护肺毛细血管糖萼结构。

该研究首次阐明WTAP通过m6A依赖性方式稳定MYC mRNA，加剧内皮屏障损伤和炎症风暴，从而推动ARDS进展。这一发现不仅为ARDS分层诊疗提供分子标志物（WTAP/MYC），更揭示了表观转录调控在急重症中的核心作用。未来针对m6A-WTAP-MYC轴的干预策略，可能成为突破当前ARDS治疗瓶颈的新方向。